图7

AMBRA1与BCL-2竞争以结合BECLIN 1。(A类)BECLIN 1突变体图解。指出了BECLIN 1的螺旋结构域（CCD）和进化保守结构域（ECD）。(B)AMBRA1结合BECLIN 1的所有截断突变体。显示了AMBRA1和BECLIN 1的不同突变体在HEK293细胞中的共免疫沉淀。HEK293细胞与编码myc–AMBRA1、FLAG–BECLIN 1 1–353、FLAG–BECLIN 1 141–353或FLAG–BECLIN 1 141–459的载体共转染。使用抗FLAG抗体免疫沉淀蛋白质提取物。使用抗AMBRA1和抗BECLIN 1抗体，通过WB分析纯化的复合物和相应的总提取物。星号表示与BECLIN 1片段相对应的蛋白质分子量。(C类)AMBRA1不能与Beclin 1ΔBcl-2突变体共同免疫沉淀。用编码myc–AMBRA1和BECLIN 1ΔBcl-2 BD或BECLIN 2ΔECD的载体共同转染HEK293细胞。使用抗BECLIN 1抗体免疫沉淀蛋白质提取物。使用抗AMBRA1和抗BECLIN 1抗体，通过WB分析纯化的复合物和相应的总提取物。(D类)BCL-2的完整BH3结合位点不需要与AMBRA1结合。用编码myc-AMBRA1和BECLIN 1的载体共同转染HEK293细胞^125安和BECLIN 1^123A层分别与BCL-2和BCL-X相互作用或不相互作用_L（左）使用myc抗体（myc–AMBRA1）免疫沉淀蛋白质提取物。使用抗myc和抗BECLIN 1抗体，通过WB分析纯化的复合物和相应的总提取物。(E类)当AMBRA1过度表达时，BECLIN 1和有丝分裂或ER-BCL-2结合降低。用FLAG–BECLIN 1、mito-和ER-BCL-2转染HEK293细胞，并增加myc–AMBRA1cDNA。使用抗FLAG抗体免疫沉淀蛋白质提取物。用抗BECLIN 1、抗BCL-2和抗AMBRA1抗体对纯化的配合物和相应的总提取物进行WB分析。在上部面板中，与BECLIN 1共同免疫沉淀的AMBRA1对应的条带显示的暴露程度高于其他条带（mito-BCL-2和FLAG–BECLIN 2），以便更好地进行可视化。