图6

（A和B）影响肌动蛋白聚合/脱聚合的化合物（20µM细胞松弛素D[CYTD]、20µM细胞松弛素B[CYTB]、1µM拉通库林A[LATR]、1¦µM茉莉基内酯[JASP]）、MLCK抑制剂（5µM ML-7和5µM ML-9）和肌球蛋白II抑制剂（80µM Blebbistatin[BLEB]）使用Gluc-entry分析（HeLa细胞；菌株WSN；MOI 0.5；感染前1小时至2小时p.i.用抑制剂孵育），检查其对DYNA-IND IAV进入PBS（A）或DYNA-DEP IAV进入（PBS，10%FCS和80µM发电机）（B）的影响。16小时p.i.测定荧光素酶活性（RLU绘制在y轴上，相对于在没有影响actomysoin网络的化合物的情况下获得的活性（灰色条，100%）。（C） HeLa细胞的共聚焦图像的一个示例，表达野生型Rab5-GFP融合蛋白（Rab5 wt）（上面板，绿色荧光识别转染细胞）或接种IAV（WSN株；MOI 1）的Rab5-GFP融合蛋白的显性阴性突变体（Rab5 DN；下面板）。感染4小时后，细胞固定并染色（用针对NP的单克隆抗体进行红色染色，以识别感染细胞；在C组感染的例子中，在PBS中进行感染，以检查DYNA-DEP进入途径）对具有显性阴性和野生型MLCK（MLCK-DN和MLCK-wt）和肌球蛋白II-尾结构域（MyoII-tail）或肌球蛋白II-头结构域（MyoII-head）的GFP融合蛋白进行了类似的实验。在DYNA-DEP（PBS）和DYNA-IND（PBS、10%FCS和80µM发电机）进入条件下感染转基因细胞。（D–F）通过计数>100个细胞来量化结果（实验分三次进行；计算转染细胞、感染细胞、转染细胞和感染细胞）。绘制转染细胞的相对感染率（取同一样本中未转染细胞感染率为100%）。因此，虽然与非转染细胞（D，黑条）相比，Rab5 wt转染细胞的感染没有显著减少或增强，但在DYNA-DEP和DYNA-IND进入条件下，Rab5-DN转染细胞在较低水平上受到感染。相反，用MCLK DN（E）或MyoII头（F）转染的细胞通过DYNA-IND途径以显著较低的水平感染，而DYNA-DEP途径不受影响。不同结构的转染效率如下：RAB5 wt（61%）；RAB5 DN（45%）；MLCK重量（50%）；MLCK DN（49%）；MyII-tail（69%）；MyII-头（55%）。