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图6。LC3的翻译后处理。(A类)LC3及其同系物C末端片段的氨基酸序列比对。与LC3相同的残留物用黑色阴影表示。雷诺数,褐家鼠; Hs,智人; 理科,酿酒酵母; 在,拟南芥; 总工程师,秀丽隐杆线虫; 磅,双色拉克里亚从EST克隆(au96a10.y1)推导出HsLC3的序列。(B类)(C)中使用的蛋白质的结构。显示了N端的Myc表位标签、C端的HA表位标签和假设的裂解位点Gly120残基。建造LC3G120A型,LC3中引入了一个单点突变,导致氨基酸在120位从甘氨酸替换为丙氨酸。建造LC3ΔC22,22个C末端残基被PCR删除。生命周期3ΔC22、G120A也通过LC3的定点突变产生ΔC22ΔC22突变体仅在N-teminus用Myc表位标记。(C类)HeLa细胞瞬时转染Myc-LC3-HA(1-3区和13-15区)、Myc-LC3G120A型-HA(4-6车道和16-18车道)、Myc-LC3ΔC22(7–9车道)或Myc-LC3ΔC22、G120A(10–12车道)。细胞被标记为[35S] 蛋氨酸/半胱氨酸4分钟,在37°C下追逐0、6和90分钟。用抗Myc表位抗体(泳道1-12)或抗HA表位抗体(泳道13-18)对细胞裂解物进行免疫沉淀,并通过SDS–PAGE和生物图像分析仪对免疫沉淀进行分析。