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科学。作者手稿;PMC 2011年3月7日发布。
以最终编辑形式发布为:
科学。2001年4月27日;292(5517): 727–730.
数字对象标识:10.1126/科学.1059108

图4

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的电阻Bax、Bak多重内在死亡信号的双重缺陷MEF。(一个)线粒体依赖性内在信号对MEFs凋亡死亡的易感性。野生型,Bax公司−/−贝克−/−、DKO和投标−/−用1µM staurosporine、100µM etoposide、UVC(60 J/M)处理原发性MEF2)或TNF-α(1 ng/ml)+放线菌素D(2µg/ml),显示48小时的时间点。绘制凋亡DNA片段的酶联免疫吸附测定(Roche)的重复样品的平均值,作为三个独立实验的代表。(B类)内质网刺激对MEF凋亡死亡的敏感性。如(A)所示,用2µM的thapsigargin或tunicamycin(1µg/ml)处理基因型MEF,绘制凋亡DNA片段48小时时重复样品的平均值。刺激后4天通过Annexin-V染色评估DKO MEF也显示长期存活(12). (C类)使用DEVD-AFC荧光底物(Clontech)定量效应器caspase活性(例如caspase-3)。用以下死亡信号处理野生型和DKO MEF,并在指定的时间点收获:2µM thapsigargin(36小时)、tunicamycin(1µg/ml;36小时),1µM staurosporine(16小时),100µM etoposide(24小时),UVC(60 J/M2; 24小时)和TNF-α(1 ng/ml)+放线菌素D(2µg/ml;16小时)。结果代表了三个独立的实验。(D类)MEF对UVC照射的剂量反应。通过台盼蓝排除法定量细胞死亡,并绘制24小时时间点。(电子)紫外线照射后MEF凋亡的时间进程(60 J/m2). 通过流式细胞术检测Annexin-V染色定量细胞死亡。在staurosporine和etoposide以及UVC治疗后4天,也观察到DKO MEF的长期存活(12). (F类)MEF细胞凋亡对血清退出的反应时间进程。通过台盼蓝排除法定量细胞死亡。

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