图3

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热休克后339个假定聚SUMO结合物的鉴定。(A类)左图:考马斯染色SDS-PAGE凝胶,显示从正常条件(37°C)或热应激(43°C)下生长30分钟的HeLa细胞中RNF4wt洗脱的蛋白质和RNF4mt纯化的多聚SUMO结合物。显示MW标记,右侧显示九个切片的明显MW边界。右:九个切片中每个切片中发现的所有蛋白质的预测分子量的频率直方图。粉红色阴影区域显示切片的明显MW区域。(B类)与RNF4wt结合但不与RNF4mt结合的971蛋白质的表观和预测分子量之间的分子量差异(ΔMW)的频率直方图。直方图的彩色区域表示ΔMW值与未修饰蛋白质一致(灰色),与SUMO分子的单个或多个副本一致(红色)。(C类)所示数据集中已知SUMO底物和ψKxE/D SUMO共轭共有基序频率的比较。该比较显示了从粗HeLa提取物中鉴定的2663个蛋白质的数据,以及本研究中鉴定的全部蛋白质列表(971个蛋白质),以及SUMO化学计量比为0和1(“0+1”;632个蛋白质)或2或更多(“2+”;339)的亚群。星号表示为冗余筛选的列表。(D类)RNF4纯化物的Western blot分析,无论是模拟的还是经SENP1处理的,带有指示的抗体。mut,突变体;MW,分子量;PML,多粒细胞白血病;RNF4,环形填料4;SDS-PAGE、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;SUMO,小泛素样修饰物;wt,野生型。