图4。

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激活Ras突变的人类癌细胞系对自噬抑制的敏感性。(,顶部面板)Western blot显示HA-K-ras的蛋白质水平V12版本在iBMK细胞系中,内源性Ras、磷酸化p42/44和人类癌症细胞系中的p42/44。这个底部图中显示了Ras水平相对于β-肌动蛋白的定量。(B类)用荧光自噬体标记物p-tFL-LC3瞬时转染人癌细胞,并在营养充足的条件下培养。典型图像描述了RFP-LC3定位。数字表示LC3易位到自噬体的细胞百分比(点状定位)。(C类,顶部小组)在营养充足的条件下培养人癌细胞,并在30%的汇流处收集,以评估内源性LC3-I到LC3-II的过程。(底部面板)LC3-II与LC3-I表达的比率以图表形式定量显示。(D类)评估CQ(30μM)治疗下人类癌细胞株内源性LC3-I到LC3-II的处理,以阻断自噬途径的流量。人类癌细胞在营养充足的条件下培养,当细胞融合25%-30%时用CQ处理,并与CQ给药开始时的细胞进行比较。(E类)30μM CQ处理6种不同癌细胞株的生长曲线D类. (F类,顶部面板)Western blot显示Atg5和Atg7的表达。(底部小组)六种不同癌症细胞系对慢病毒shRNA击倒重要自噬调节因子Atg5和Atg7的细胞活性的反应。