图4

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TDP-43的3′UTR中的一个区域介导自动调节()GFP-3′UTR wt和Δ369和Δ669构造的示意图。野生型TDP-43编码序列以灰色显示。下部面板显示导致Δ1812 mRNA和蛋白质亚型的剪接事件。(B类)在TG-TDP43转基因诱导(+)后,将GFP-3′UTR wt、Δ369和Δ669构建物转染到HEK293稳定细胞系时,GFP蛋白表达。通过联合转染GFP表达载体,使转染效率标准化(下表)。在GFP-3′UTRΔ369和Δ669(−)和(+)通道中,western blot还包含一个额外的40kDa蛋白带,称为Δ1812。用抗GFP检测不同蛋白(C类)显示了在Tet诱导之前(−)和之后(+),HEK293稳定细胞系中源自GFP-3′UTR-wt、Δ369和Δ669构建体的转录物的northern印迹分析。由于使用不同的多聚腺苷化位点,所有构建物都产生两种主要的mRNA物种。除这些物种外,GFP-3′UTRΔ369和Δ669构建物还产生异常剪接mRNA亚型(Δ1812),该亚型解释了western blots中异常蛋白的产生(B类).