TDP-43特异性结合其3′UTR区域。(一)描述TDPBR位置和序列的TDP-43基因示意图(B类,片段2和3)位于3′UTR内。编码外显子和未翻译区域分别以黑色和灰色显示。(B类)在左侧面板中,报告了TDP-43的3′UTR区域以及测试TDP-43结合的不同区域(图1-4)。在此面板中,不同实验报告的所有CLIP序列/簇(J Ule和J Tollervey未发布的结果)均以粗体突出显示。HEK 293细胞中主要的34-nt CLIP序列,用于比较结合分析(C类–E类)已装箱。右侧,使用这些不同片段的重组TDP-43进行带移分析。(C类)分析GST-TDP43突变体与主要34nt CLIP序列(盒装)和(GU)的结合6RNA作为对照。(D类,E类)使用恒定水平的野生型蛋白质结合放射性标记(GU)的竞争分析6作为未标记34-nt CLIP序列浓度增加的函数(D类)或与放射性标记的34-nt CLIP序列结合,作为未标记浓度(GU)增加的函数6。每个小组的第一条通道都没有蛋白质。~0.5μg不同的重组蛋白与1 ng不同的5′标记单链RNA寡核苷酸一起使用。利用2.5、3.75、5和10 ng未标记的34-nt CLIP序列和(GU)进行竞争分析6.