蜗牛是RKIP表达的直接阻遏物a）通过Western blot分析比较前列腺癌细胞系中RKIP和蜗牛的表达。使用多克隆抗RKIP或蜗牛抗体对Triton x-100提取的细胞裂解物（30μg）进行免疫印迹。用抗肌动蛋白血清作为负载对照对相同的膜进行再印迹。b-c）蜗牛异位表达抑制RKIP表达。b） 用特定抗体对稳定感染指示逆转录病毒或EVC（空载体对照）的癌细胞提取物进行免疫印迹分析。c） 稳定感染所示逆转录病毒的LNCaP细胞中RKIP mRNA水平的比较。用qRT-PCR测定感染细胞内RKIP mRNA的内源性水平，并将其归一化为GAPDH水平。每个条形代表平均值±PCR反应的SEM一式三份。d） 蜗牛在前列腺癌细胞中的下调增强了RKIP的表达。细胞被表达shRNA的逆转录病毒稳定感染荧光素酶或蜗牛通过免疫印迹分析测定感染细胞内RKIP、微管蛋白和蜗牛蛋白的内源性水平。e） 蜗牛抑制癌细胞中的RKIP启动子报告子。用指定的效应质粒和报告质粒转染MCF7细胞。转染48h后收集细胞进行荧光素酶检测。包含RKIP启动子区域的RKIP-LUC报告子示意图如左图所示。显示了假定电气箱的位置。TK代表胸苷激酶。f） 蜗牛与RKIP公司发起人。在稳定表达Flag-taged蜗牛蛋白的LNCaP细胞上使用抗Flag或抗HA抗体进行ChIP分析。用抗体免疫沉淀下来的DNA用引物对PCR扩增，如下图箭头所示。
