图5

答：。转染GFP-Atg16L1（绿色）和CFP-LC3（蓝色）的HeLa细胞在4°C下与Alexa fluor-555结合的霍乱毒素亚基B（红色）孵育15分钟（允许毒素与质膜结合）。然后将细胞在37°C（允许霍乱毒素内化）下培养10分钟，并固定以进行共聚焦分析。Atg16L1和霍乱毒素阳性的水泡呈黄色（也可参见高倍图像）。注意，与霍乱毒素共定位的小Atg16L1囊泡对LC3呈阴性（如黄色箭头所示），并且与霍乱毒素和LC3共定位的Atg16L1囊泡（如蓝色箭头所示）显示在右侧的放大面板中。比例尺–10μm。B。将转染GFP-Atg16L1（绿色）的HeLa细胞与Alexa fluor-555结合的霍乱毒素亚基B（红色）孵育24小时，如一个固定后，对其进行内源性EEA1（蓝色）免疫染色，并通过共焦显微镜进行分析。Atg16L1和霍乱毒素B阳性的囊泡为黄色（白色箭头），EEA1和霍乱毒阳性的囊胞为紫色（蓝色箭头），并在高倍图像中显示。图表显示了共同本地化的百分比。n=20个电池。比例尺–10μm。C、。用HBSS处理HeLa细胞6小时后，将Alexa fluor-555标记的霍乱毒素亚基B（红色）培养为一个然后固定细胞，并对内源性Atg16L1（绿色）和内源性EEA1（蓝色）进行免疫染色。细胞分析如下B类图中显示了定量。比例尺–10μm。箭头显示Atg16L1-cholera毒素共同定位。三角图显示EEA1-cholera毒素共同定位。n=20个电池。D。用HBSS处理HeLa细胞6小时后，与Alexa fluor-555标记的霍乱毒素亚基B（红色）一起孵育，如一个然后固定细胞，并对内源性Atg5（绿色）或内源性Atg 12（绿色）进行免疫染色。Atg5（n=18个细胞）或Atg12囊泡（n=39个细胞）与霍乱毒素的共定标以黄色（箭头）显示并在图表中量化。比例尺–10μm。图中的所有误差条都表示SEM。