图2

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通过共免疫沉淀揭示过表达的CXCR4和CD74的蛋白质复合物形成。HA-CXCR4和V5-CD74融合蛋白或HA-CXCR与CD74minRTS蛋白在HEK293细胞中体外表达。(a,左)用抗V5抗体免疫沉淀V5-CD74,用抗HA或抗CXCR4抗体检测共沉淀CXCR4。(a,右)为CD74开发的对照印迹。(b,左)如(a)所示的反向设置,用抗HA抗体进行免疫沉淀,用抗V5抗体进行免疫印迹。(b,右)通过抗HA或抗CXCR4抗体为CXCR4开发的对照印迹。(c,左)设置如(b)所示,但转染pCD74minRTS并用抗CD74抗体形成印迹。(c,右)针对CXCR4开发的对照印迹。仅用珠子进行对照免疫沉淀(对照);输入通道表明对5%的相应HEK293裂解产物进行了Western blot分析。分子量标准品在相同的凝胶(Mr)中电泳。免疫沉淀;WB、Western blot。表明次级WB抗体对免疫球蛋白重链(IgG-HC)和轻链(Ig G-LC)进行了非特异性染色。请注意,抗HA抗体是一种较差的WB抗体;因此,CXCR4的输入控制显示弱或无带,但可通过抗CXCR4检测到(a、左侧和b、右侧的下部面板)。