图2。

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TERT阻断进展诱导的DNA损伤信号。(A类)γH2AX(绿色)和ATM的共聚焦免疫荧光显微镜-P(P)逆转录病毒转导和标记物选择后2周,表达TERT或载体控制的HGPS成纤维细胞中的(红色)DNA损伤灶。合并后的图像叠加在DNA的DAPI(蓝色)染色上,γH2AX和ATM共定位-P(P)黄色。(B类)染色定量如A所示。含有0、1、2-5或>5γH2AX和ATM的细胞百分比-P(P)显示焦点。每种情况下,至少有300个细胞被计数。(C类)显示ATM水平的Western blot-P(P)感染和选择后2周,HGPS成纤维细胞表达TERT或载体对照。β-肌动蛋白水平显示为对照。()Western blots比较HGPS成纤维细胞中内源性前体蛋白和NDF中异位前体蛋白的水平。拉明A、拉明C和β-肌动蛋白水平显示为对照。(电子)γH2AX(绿色)和ATM的共焦免疫荧光显微镜-P(P)慢病毒转导和选择后,在有或无异位TERT和表达前体蛋白或载体控制的NDF中出现(红色)DNA损伤灶。合并后的图像叠加在DNA的DAPI(蓝色)染色上,γH2AX和ATM共定位-P(P)黄色。(F类)染色的定量显示在E中。具有0、1、2-5或>5γH2AX和ATM的细胞的百分比-P(P)显示焦点。每种情况下,至少有300个细胞被计数。(G公司)异位TERT表达的HGPS成纤维细胞延长寿命和减少DNA损伤的时间进程。用表达TERT的慢病毒或载体对照感染迟通过HGPS成纤维细胞并选择2周。选择后,立即通过跟踪PD与时间的关系来测量寿命。使用G1门控细胞对γH2AX进行流式细胞术分析,测量DNA损伤信号。在第7、17、25和39天检测γH2AX阳性。误差条表示代表性实验的标准偏差,一式三份。