In-vitro公司突变型和野生型PRC2的组装和功能分析EZH2型（A） 野生型EZH2和四个Y641突变体中的每一个与野生型AEPB2、EED、SUZ12和RbAp48一起使用杆状病毒表达系统在SF9细胞中共同表达（方法）。这五种蛋白质结合在一起形成酶活性PRC2复合物在体外SF9细胞纯化的复合物显示了这些蛋白中的每一种的强表达，并证实了它们与PRC2的结合和组装。（B） Western blot证实了四个突变结构中每个结构的EZH2蛋白的表达。（C） 然后使用生物素化组蛋白H3（21-44）肽和S-腺苷蛋氨酸（在检测缓冲液中）对纯化的复合物进行检测，以检测酶活性。甲基化组蛋白H3是使用一种高度特异的抗体来测量的，该抗体只识别组蛋白H4的三甲基化K27残基（方法）。用时间分辨荧光（620nm）检测二级抗体，并用铕标记。以不同的纯化PRC2量（0至200ng）测试每个突变株（和野生型EZH2）的PRC2甲基化酶活性。计算出H、N、S和F突变体的四个突变体的比活性分别为0.001、0.0012、0.0011和0.0009 pmol/min/ug（平均值=0.00105）。野生型酶（蓝色）的比活性为0.0071（约为6.8倍）。误差条反映了三次测量的标准偏差。
