图2

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NAF-1/BCL-2相互作用。(A类)内源性NAF-1和BCL-2的协同免疫沉淀。收集SK-Mel5细胞的裂解物,用抗NAF-1抗体进行免疫沉淀。用抗BCL-2和抗NAF-1对沉淀进行免疫印迹。(B类)固定H1299细胞,并用抗NAF-1和抗Calnexin或抗细胞色素双重染色c(c)抗体。比例尺代表10μm。(C类)NAF-1-Flag和HA-BCL-2b5的共免疫沉淀。收集感染Ad-NAF-1-Flag的H1299 HA-BCL-2b5细胞的裂解物,并按(A类). ()NAF-1的CDGSH铁结合结构域的突变干扰NAF-1与BCL-2的结合。H1299 HA-BCL-2b5细胞感染了Ad-rtTA、Ad-NAF-1-Flag或Ad-NAF-1-mut-Flag(C99S C101S C110S H114Q)。裂解液按(A类). 使用Scion Image软件进行密度分析,以量化NAF-1-Flag和NAF-1-mut-Flag的表达和共沉淀水平。图表描述了共沉淀蛋白与表达水平的比率。(电子)一个功能性CDGSH铁结合结构域是必需的,但不足以实现NAF-1和BCL-2的细胞溶质结构域之间的相互作用。HA-BCL-2ΔTM为在体外将翻译成兔网织红细胞裂解物的等分样品添加到每个GST下拉反应中。使用的GST融合蛋白为GST单独、GST-NAF1-C、GST-NAF1-C-mut(C99S C101S C110S H114Q)和GST-MitoNEET-C。使用抗HA和抗GST检测蛋白。