代谢应激促进自噬缺陷细胞ROS生成增加和染色体不稳定性(A) 自噬不足导致活性氧生成增加。覆盖显示Bcl-2表达的ROS水平贝克林1+/+(绿色)和贝克林1+/−正常生长(0Di)和0.5、1、2.5和24小时时的iBMK细胞(蓝色)(x轴,对数刻度)(贝克林1+/+,绿色箭头和贝克林1+/−,红色箭头)。未经处理的细胞中的ROS水平以虚线显示,以供比较。
(B) 来自三个独立实验的代表性直方图,测量Bcl-2表达的平均活性氧水平贝克林1+/+和贝克林1+/−iBMK细胞如(A)所示。
(C) 清除活性氧可部分缓解代谢应激的易感性,并可因代谢应激的等位基因丢失而恢复贝克林1.表达Bcl-2的典型延时图像贝克林1+/+和贝克林1+/−在活性氧清除剂NAC(1mM)存在(NAC)和不存在(UT)的情况下,经过5天的代谢应激恢复期的iBMK细胞(显示了与时间0相比粘附细胞的相对百分比)。
(D) 清除活性氧抑制自噬缺陷患者p62的积累(贝克林1+/−和第5天−/−)单元格。Bcl-2表达中p62水平的Western blot分析贝克林1+/+,贝克林1+/−,第5天+/+和第5天−/−iBMK细胞系经过0或7天的代谢应激,然后在无NAC和有NAC的情况下恢复1天。
(E) 活性氧清除限制与等位基因缺失相关的非整倍体进展贝克林1.表达Bcl-2的二倍体DNA含量的流式细胞术分析贝克林1+/+和贝克林1+/−iBMK细胞在存在(蓝色)或不存在(红色)ROS清除剂NAC(1mM)的情况下生长。数字代表决定倍性的传代数。