TDP-43和ALS连接突变体的聚集体内. A类，示意图显示疾病相关TDP-43突变。与WT相比，突变的色码表示聚集(红色=骨料比WT多得多，绿色=骨料多于WT，以及黑色=与WT一样多的骨料）。B类用抗GFP抗体免疫印迹法测定YFP、WT和突变TDP-43-YFP的表达水平。磷酸甘油激酶1(第1页)用作加载控件。C类4′，6-二氨基-2-苯基吲哚染色的代表性荧光显微镜图像(蓝色表示细胞核的位置）WT或突变TDP-43-YFP(绿色).D类TDP-43突变对聚集的影响体内通过计数含有>3个病灶的细胞数量进行量化。数值表示平均值±S.E(n个≥3，每个样品至少200个细胞）。仅表达YFP的细胞不含病灶（数据未显示）。E类，未标记的TDP-43也会在酵母细胞中形成聚集体。用抗TDP-43抗体的免疫细胞化学方法观察TDP-43的表达。箭头指向细胞质TDP-43内含物。用空载体转化的细胞作为抗体特异性的对照。F类沉淀分析证明TDP-43在酵母细胞中形成不溶性聚集体。与之前的研究一样，对表达YFP、htt25QCFP、htt103Q-CFP或WT和突变TDP-43-YFP的酵母细胞进行6小时的裂解和处理，以进行沉降分析(19). 通过离心分离可溶和不可溶部分。20%的颗粒组分和10%的可溶性和总组分通过SDS-PAGE进行分离，然后用抗GFP抗体进行免疫印迹。YFP是完全可溶的，WT和TDP-43分为可溶和不可溶部分，类似于亨廷顿蛋白（htt25Q（大部分可溶）或htt103Q（大部分不可溶）的聚集蛋白片段。这个箭头表示凝胶顶部。G公司，沉淀分析按F类除了WT和Q331K TDP-43构建物诱导4小时外，此时，不溶性颗粒部分中Q331K的相对含量大于WT TDP-43。吨，总计；S公司，可溶；P（P），颗粒。显示了三个独立实验的代表性图像。H（H）WT和Q331K TDP-43聚合的时间历程分析表明，Q331K在早期时间点形成的离散聚合比WT更多。
