p38α、-β和-γ亚型在原代表达人成纤维细胞与致癌激活ras（拉斯维加斯）在期间衰老诱导。 一BJ细胞（PD26）的Western blot分析用检测FLAG-p38和肌动蛋白的FLAG-tagged p38亚型转导。B类转染FLAG-p38的BJ细胞的Western blot分析亚型和Ha-RasV12(Ras公司)，MKK3E或矢量(白色),检测磷酸化p38、FLAG、Ras、MKK3和肌动蛋白。在第8天裂解细胞PD30时Ras后转导。C类，诱导的激酶活性ATF2的FLAG-p38亚型ras（拉斯维加斯）.FLAG-p38亚型用FLAG-p38和Ha-RasV12转导的BJ细胞免疫沉淀或Ras转导后第8天PD30处的载体（与B类)使用琼脂糖结合的抗FLAG M2抗体并孵育在存在[γ]的情况下使用GST-ATF2-32P] ATP。磷酸化放射自显影检测ATF2。ATF2的输入由以下公式确定考马斯亮蓝R染色。D类，蛋白质印迹分析用Ha-RasV12、MKK3E或载体转导的BJ细胞检测磷酸化p38，p38α、p38β和p38γ使用特定抗体。细胞是在PD25时Ras转导后第8天裂解。每组相同的裂解物含有用载体Ha-RasV12转导的BJ细胞裂解物的集合，或MKK3E在相同的SDS-聚丙烯酰胺凝胶上并排溶解转移到硝化纤维膜上。膜被切成了碎片，每个含有一组裂解物。这些膜片当时是与磷酸化p38、-p38α、-p38β抗体杂交-p38γ。化学发光信号在将膜重新对准到原始位置。的位置p38α、p38β和p38γ标记为箭头.
