TOR磷酸化ULK1和Atg13。（A和B）从HEK293T细胞中免疫沉淀内源性mTOR，培养在含有抗mTOR抗体的完整培养基中，如材料和方法。作为对照，使用正常小鼠IgG进行免疫沉淀。使用FLAG标记的ULK1对所得沉淀物进行mTOR激酶分析K46N公司（一个激酶缺失突变体）（a）或Atg13（B）作为底物。GST-PRAS40和GST-4E-BP1用作阳性对照，GST单独用作阴性对照。（C） HEK293T细胞在饥饿培养基中培养指定时间。总细胞裂解物通过免疫印迹分析进行分析。（D） 用空载体或ULK1-FLAG转染HEK293T细胞。然后将细胞饥饿180分钟，然后在新鲜的完全培养基中培养指定的时间。如中所述对细胞裂解物进行分析A.（E）NIH3T3细胞在完全培养基或饥饿培养基中培养180分钟。在补充实验中，饥饿细胞在补充前用100 ng/ml雷帕霉素或载体（DMSO）预处理30分钟，然后在新鲜的完全培养基中再加上或不加雷帕霉素培养30分钟。
