图9

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雷帕霉素处理后细胞周期分析。

在含有10%血清、4 mM谷氨酰胺±雷帕霉素或0 mM谷氨酸±雷帕霉素、±dNTPs和BrdU的培养基中释放正常细胞和转化细胞,并同步24小时血清饥饿,以进行连续DNA标记。在指定的时间点收集细胞,用碘化丙啶和抗BrdU特异性抗体进行染色,并用流式细胞仪进行分析。G中细胞的百分比1(面板A和B)、S(面板C和D)和G2/表示在上述介质中释放并通过双参数分析获得的正常(左侧面板)和转换(右侧面板)细胞的M(面板E和F)相。星号表示S或G2/在两种谷氨酰胺可用性中确定了M相峰值。误差条对应于三份分析的标准偏差。