图1

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谷氨酰胺缺乏诱导肿瘤细胞增殖停滞和S期积累K-ras公司转化成纤维细胞。

正常(⧫)和转换(▪) 细胞系以3000个细胞/厘米的速度培养2在正常介质中的6孔板中。24小时后,用正常培养基−4 mM谷氨酰胺-(a)、中间培养基-1 mM谷氨酸-(B)和低培养基-0.5 mM谷氨氨酸-(C)替换培养基,并在指定时间收集细胞并进行计数。(D) 96小时时在4 mM谷氨酰胺(左图)和0.5 mM谷氨酸(右图)中培养的正常细胞(上图)和转化细胞(下图)的形态学分析。在相控显微镜下观察细胞。将指数生长的正常细胞和转化细胞在含有4mM和0.5mM谷氨酰胺的培养基中培养更长时间(24、48、72、96和144 h),然后采集、计数并在用碘化丙啶(E)染色后进行FACS分析,或用BrdU脉冲30分钟,然后使用抗BrdU特异性抗体(F)通过荧光显微镜进行分析。结果是至少三次测定的平均值,并显示标准偏差。对于BrdU染色,每个样本至少分析200个细胞。