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2008年8月30日在线发布。 数字对象标识:10.1093/脑/天198

图7

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慢性CNS炎症导致神经干细胞静止在体外体内. (A类)在存在Th1细胞因子(IFN-γ,500 U/ml;TNF-α,200 U/ml,IL-1β100 U/ml)或Th2细胞因子(IL-4、IL-5和IL-13,均为10 ng/ml)的情况下,对主要SVZ NPC进行NCFC分析。在最后48小时(白色条)或整个试验期间(黑色条),SVZ细胞以克隆密度接种在富含细胞因子的NeuroCult中。用Th1或Th2细胞因子处理48小时后,所生成的菌落百分比没有差异,而较长时间(3周)的Th1细胞因子处理导致大菌落生成完全失败。数据表示为菌落/大小占总电镀细胞±SEM的平均百分比,从以下总数中获得n个≥3个独立实验。°P(P)≤ 0.0001; *P(P)≤ 0.05. (B–D类)用富含细胞因子的CGM体外培养NPC的增殖分析。(B类)Th1(白圈)或Th2细胞因子(灰圈)与CGM单独(黑圈)进行比较。注意,Th1条件细胞的增殖率早在n个=扩增2代,而在富含Th2的CGM培养的神经球中没有观察到差异。(C类)Th1细胞因子退出后,NPC在CGM中继续生长n个=6次扩增,与对照NPC(黑圈)相比,之前接触Th1细胞因子的NPC(白圈)生长效率没有差异。(D类)成长NPC的增殖分析在体外富含单个Th1细胞因子的CGM。单用干扰素-γ(白钻石)可显著降低生长速度(从四到六次扩增),而用TNF-α或IL1-β处理的细胞在任何时间点的生长效率均无差异。数据表示为细胞的绝对数量±SEM,总计n个≥3个独立实验*P(P)与对照组相比,≤0.05。(E类)NPC在富含Th1(白色条)或Th2细胞因子(灰色条)的CGM中培养48小时。单独在CGM中培养的NPC被用作对照(黑条)。注意细胞中显著向G方向移动(33-46%的细胞)0/G公司1以及暴露于Th1而非Th2细胞因子后S期细胞减少。数据表示为门控细胞±SEM的平均百分比,总计n个≥5个独立实验**P(P)与对照组相比,≤0.05。(F类)Ki67的FACS分析。注意G的显著增加0-封闭Ki67——Th1细胞因子调节但非调节(Ctrl)或Th2细胞因子调节NPC中的细胞(灰色条)。黑色条表示Ki67+单元格。数据表示为门控细胞的平均百分比±SEM,总计n个≥10个独立实验。P(P)与对照组相比,≤0.0001。(G公司)与基线值相比,在注射细胞因子3天后,HC或EAE 20 dpi小鼠的SVZ背外侧局部注射IFN-γ/TNF-α后,GF显著降低。注射细胞因子10天后(白条),GF仍显著低于HC的正常值。在处死前,通过连续接触全身IddU 10小时来检测NPC的增殖,并仅通过计算IddU进行评估+/伊巴1——(面板中分别为绿色和红色单元格)SVZ中的单元格。黑色条表示基线时间点。数据表示为平均标记指数(L.I.)±SEM,总计n个≥3只小鼠。在这些面板中,显示了注射IFN-γ/TNF-α的两个代表性HC和EAE小鼠的SVZ图像。细胞核用DAPI复染。比例尺:50μm*P(P)≤ 0.05; **P(P)≤ 0.005. LV=侧脑室。

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