图6

在MDCK克隆II/G和II/J细胞极性发育过程中，完整微管在新合成的E-cadherin靶向质膜中的作用。按照材料和方法中的描述建立融合MDCK克隆II/G和II/J培养物。如图所示​图3A，三A、 培养物在诺克唑不存在（−noc）或存在（+noc）的条件下培养。在37°C的最后一个小时，培养物被代谢标记为[³⁵S] 蛋氨酸/半胱氨酸。在诱导细胞-细胞接触后的指定时间（10–120 h），用NHS-SS-生物素在顶膜（Ap）或基底膜（BL）上标记双重滤膜。然后在RIPA缓冲液中提取细胞，如材料和方法所述。样品依次用E-cadherin抗血清沉淀，然后用亲和素琼脂糖沉淀。然后处理免疫沉淀物进行SDS-PAGE和荧光成像。（A） 给出了每个时间点代表性样品的荧光检测结果。使用分子动力学荧光成像仪（820型）直接测定凝胶中标记的E-cadherin的数量。MDCK克隆II/G（B）和克隆II/J（C）细胞的蛋白质的扫描密度测定结果以新合成的E-钙粘蛋白总量的百分比表示，在没有诺可唑的情况下传递到质膜（传递百分比）。条形图描述了一到三个独立实验的平均值，这些实验由散点图中的一个符号表示。