图2

在MDCK克隆II/G和II/J细胞中极性发育过程中，新合成的gp80、gp135/170和E-钙粘蛋白靶向质膜。按照材料和方法中的描述建立融合MDCK克隆II/G和II/J培养物。每个克隆的重复过滤器在新陈代谢中标记为[³⁵S] 蛋氨酸/半胱氨酸在37°C下保持1小时。代谢标记期结束后，立即从过滤器的顶部和底部收集培养基，并用SDS-PAGE进行分离，以监测新合成的gp80向顶部（Ap）和基底外侧（BL）表面的传递。然后用NHS-SS-生物素标记细胞顶部（Ap）或基底外侧（BL）表面。按照材料和方法中的描述，在RIPA缓冲液中提取细胞。然后将样品分成两半，用gp135/170单克隆抗体或E-cadherin抗血清沉淀，然后用亲和素琼脂糖沉淀。在诱导细胞-细胞接触后的指定时间收集的样品中的培养基和免疫沉淀物进行SDS-PAGE和荧光照相。给出了每个时间点两到四个独立实验的代表性样品的荧光检测结果。