图1。

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DFCP1中ER靶向域的识别和部分特征。(A) DFCP1的连续截断确定了一个内部域,这对于在ER中指定本地化是必要的,也是足够的。ER本地化需要用红色和下划线表示的残留物。(B) GFP-[416–543]结构定位于HEK-293细胞中的内质网,而该结构域内的突变体(此处显示的是W543A结构)是细胞溶质的。如图所示,在ER靶向中重要的选定残基也在全长蛋白中被诱变。全长DFCP1(myc-DFCP1)定位于ER,而DM(myc-dmDFCP1。关键残基的突变导致细胞质重新分布(此处显示为W/A突变)。所有样本均含有钙连蛋白(CLNX)抗体,钙连蛋白是一种内质网蛋白。(C) 将416–543结构域的WT或W/A突变体纯化为GST融合蛋白(输入),并与大鼠肾脏微粒体混合。结合材料通过离心回收。请注意,WT衍生蛋白与微粒体结合,而W/A突变体没有。(D) 在与GST-[416-543]结构域孵育和离心之前,用指定单位的胰蛋白酶在冰上处理C中的微粒体。注意,微粒体上发现的外周蛋白β-COP几乎完全被胰蛋白酶消化;在这些条件下,DFCP1片段与微粒体的结合没有改变。