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图S3GFP-DFP1与自噬相关蛋白和内质网的共定位。(A) 表达GFP-DFCP1的HEK-293克隆未经处理或饥饿60分钟,然后进行内源性MAP-LC3染色。请注意,GFP-DFCP1和MAP-LC3在饥饿期间都易位到点状结构。50%的内源性MAP-LC3点与GFP-DFCP1共定位。饥饿期间的一系列同位化示例类似于实时成像期间看到的交互作用,显示在合并图像的面板A–h中,并作为单独的放大面板显示。(B) 表达GFP-DFCP1的HEK-293细胞或克隆未经处理或饥饿60分钟,然后染色以检测内源性Atg5。注意,在这两种细胞类型中,Atg5在饥饿期间变得更加点状,这些点状结构与GFP-DFCP1共定位。这些图像是使用宽视野显微镜获得的。箭头突出显示了Atg5穿孔与饥饿后形成的DFCP1穿孔/环相互作用(或至少非常接近)的示例。(C) 使用共焦显微镜观察氨基酸饥饿后GFP-DFCP1与Atg5共定位的其他示例。这两组照片都来自饥饿60分钟的细胞;80%的DFCP1阳性斑点与内源性Atg5斑点共定位。面板1-3中放大了一系列同位化示例。(D) 用dsRed-ER转染表达GFP-DFCP1的HEK-293克隆,并在氨基酸饥饿期间通过共焦显微镜进行实时成像。面板A至E中显示了几个此类视频中的示例,其中DFCP1ω与ER区域(方框区域)重合。