图1

p300结合HIF-1α(28). (一)商品及服务税含有p300 C/H1指定部分的融合蛋白为构建。³⁵转录S-标记的HIF-1α翻译在体外并与指定的GST混合固定在谷胱甘肽微球上的融合蛋白。珠结合蛋白通过SDS/PAGE和放射自显影观察。(B类)全长p300（WT）和p300在第一段中删除昆虫体内合成了富含半胱氨酸/组氨酸的区域（C/H1）使用杆状病毒系统的细胞。³⁵S标记的HIF-1α合成了在体外，翻译产品与指示的p300杆状病毒混合并免疫沉淀带有p300抗体[RW128(4)]使用蛋白A琼脂糖珠。通过SDS/PAGE和放射自显影术。车道1英寸一和B类每个包含20%的输入翻译产品车道。(C类)U-2 OS细胞转染10μgpCMVβ-HA-HF-1α（+）或单独的载体（−）。细胞被标记为[³⁵S] 制备了蛋氨酸和细胞提取物，与相关杆状病毒p300物种混合（如有指示），以及然后用抗p300或抗HA抗体免疫沉淀，如在里面B类通过煮沸释放珠结合蛋白用血凝素（HA）表位抗体重新沉淀（第12章第5节）。在第二轮实验中，我们观察到了与珠子结合的蛋白质SDS/PAGE和放射自显影。打开的箭头表示HA–HIF-1α。快速迁移带的身份尚不清楚但可能代表降解产物。标准分子量（kDa；Sigma）表示。IVT中，在体外翻译；第页，降水；IP，免疫沉淀。