图7

全极化上皮细胞内源性PAR-6的鉴定及其与aPKCλ和ASIP的相关性。（a） MDCK II细胞内源性PAR-6蛋白的鉴定。用1μg亲和纯化的抗PAR-6兔多克隆抗体（GW2AP，GC2AP）或对照正常兔IgG免疫沉淀半融合MDCK细胞。使用括号（右）中所示的抗体对产生的免疫沉淀物进行Western blot分析。GW2AP和GC2AP特异性免疫沉淀一个43-kD蛋白与COS细胞表达的PAR-6结合，该蛋白被N12AP和GW2AP识别。（b） 体内PAR-6、aPKCλ和ASIP/PAR-3三元复合物的形成。使用抗-aPKCλ单克隆或抗-ASIP多克隆抗体分析如a中制备的抗-PAR-6（GW2AP）免疫沉淀物（IP）。PAR-6免疫沉淀物特异性包含内源性aPKCλ、全长ASIP及其剪接变体（底部带）。（c和d）酵母双杂交分析总结，以分析PAR-6–aPKCλ相互作用。通过在缺乏组氨酸的培养板上生长来检测相互作用。NH₂-PAR-6的末端区域包括CR1和2足以与aPKCλ（c）相互作用，而NH₂-aPKCλ的末端残基22–113足以与PAR-6（d）相互作用。