图6。

有丝分裂中SUMO结合的扰动导致染色体分离缺陷。（A） 染色体分离分析示意图。补充罗丹明标记微管蛋白的脑脊液提取物被CaCl释放到间期₂添加。在CaCl后5分钟添加2000个精子/μl₂，并将提取物在23°C下培养55分钟。通过添加新鲜CSF提取物（反应体积的50%）和或不添加dnUbc9（最终浓度150 ng/μl）诱导重新进入有丝分裂。在23°C下孵育30分钟后，第二次添加CaCl诱导后期₂（B）在指定时间取出等分样品，并使用Hoechst 33342 DNA染料（绿色）分析DNA形态，并在固定后分析微管结构（红色）。（C） 实验如上所述进行，添加了³⁵第二等分CSF提取物时的S标记证券素。对每个时间点的样品进行SDS-PAGE分离，并使用分子动力学磷光成像仪进行放射自显影。（D） 从有或没有dnUbc9的反应中分离出有丝分裂染色质，并用抗SUMO2/3和抗拓扑异构酶II抗体进行蛋白质印迹分析。