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图2。

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降低内源性整合素的表达αv(v)β3减少胶原培养过程中内皮细胞的凋亡。(A) 当在完全培养基存在下在三维胶原基质中培养时,内皮细胞发生凋亡。HUVEC用Cell Tracker green(2μM)标记,并在三维胶原凝胶、纤维蛋白凝胶或悬浮液(填充棒)中培养24小时,或者在胶原或纤维蛋白凝胶(开放棒)表面培养24小时。通过数字图像的形态学分析,对ECM相关细胞的凋亡进行评分。显示了一个具有代表性的实验,每个bar是六个低功率场的平均存活率±SE。(B) 捕获细胞跟踪器标记细胞的数字图像(左)后,在胶原(Col)或纤维蛋白(Fb)凝胶表面附着的HUVEC中评估细胞扩散。使用IP Lab软件分割细胞并计算面积。每个点显示的数据是从10个低功率场在每个时间点计算的平均±SE电池面积。(C) 使用LM609 for FACS检测腺病毒(AdASβ3)或无义腺病毒(AdNS)介导的人特异性β3整合素反义基因治疗对HUVEC中天然αvβ3表达的影响®免疫印迹分析和AP3图1A.(D)如上文所述,在三维胶原凝胶(左)或纤维蛋白凝胶(右)中培养24小时后,评估AdASβ3处理(或AdNS-处理)的HUVEC存活细胞的百分比。结果显示为两种纤维蛋白或四种胶原蛋白实验的平均值±SE。(E) β3反义处理的HUVEC表现出正常水平的ECM附着。评估AdASβ3处理的HUVECs(填充条)与ECM成分玻璃体凝集素(VN)、纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和胶原(COL)包被的孔的粘附性。附着细胞用结晶紫染色,然后洗涤、重新提取和定量结合染料,以此定量粘附(Filardo等人,1995年)与未经处理的HUVEC相关。AdNS-处理的HUVEC(开放栏)显示为控件。显示了两个独立实验的平均值±SE。(F) 如上所述,在胶原蛋白(左)或纤维蛋白(右)凝胶中,在30μg/ml单克隆抗体P4C10(抗β1整合素)、单克隆抗体LM609(抗αvβ3整合素,两种抗体或对照单克隆抗体7G7B6(抗CD25)的存在下,检测HUVEC存活率。显示存活率在24小时时显著下降(P(P)<0.05)。显示了两个类似实验中的一个。

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