图4

凋亡细胞提取物支持BAX体外靶向线粒体。(A类)³⁵S标记的转录翻译产物行李将兔网织红细胞裂解物（BAX和BAXΔART）中的cDNA与来自大鼠心脏的纯化完整线粒体进行孵育，在标准蛋白导入反应中添加1 mM dATP（lanes3, 4, 6,和7)或1 mM dATP和200μg凋亡胞浆蛋白(提取; 车道4和7)体积为50μl。反应结束时，通过离心法回收线粒体，直接或用0.1M Na萃取后，通过SDS-PAGE和荧光照相法分析颗粒₂一氧化碳_三，pH 11.5(碱性; 车道5–7). 车道1，输入翻译产品的10%。(B类)如中所示A类除了进口是用BAXΔ1-19cDNA转录产物（泳道2)如图所示，在4°C或30°C下，用0.1M Na提取线粒体后进行分析₂一氧化碳_三，pH 11.5（车道4和5). (C类)³⁵S标记的转录-翻译产物PARP项目网织红细胞裂解物（5%体积）中的cDNA与（lanes）孵育2和三)或不带（车道1)100μg凋亡细胞溶质蛋白，总体积为20μl，存在（lane三)或不在（车道1和2)对1 mM dATP和等效部分的PARP 24-kD裂解产物的外观进行分析(24K帕尔普)通过12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光成像。(天)如中所示A、，除进口前外，线粒体均用0.4mg/ml胰蛋白酶和50倍重量的大豆胰蛋白酶抑制剂处理（−胰蛋白酶前体; 柱2和4)或者在最后(+胰蛋白酶前体; 柱1和三)反应的结果。通过离心收集线粒体，并在存在的情况下导入（柱三和4)或不存在（列1和2)凋亡细胞溶质(提取)，并测定了碱不溶性全长BAX的相对量（最大设置为100）。