酵母核膜蛋白与哺乳动物孔复合物蛋白抗体交叉反应

我们使用一种针对大鼠肝细胞核蛋白的单克隆抗体来研究酵母细胞核中的两种交叉反应蛋白。在大鼠肝脏中，这种单克隆抗体mAb 414与核孔复合物蛋白质结合，包括一种分子量为62000的蛋白质（Davis，L.I.和G.Blobel.1987）。程序。国家。阿卡德。科学。美国84:7552-7556）。在酵母中，mAb 414通过免疫印迹与两种表观分子量分别为110000和95000的蛋白质发生交叉反应，分别称为p110和p95。通过免疫印迹法对亚细胞组分的检测表明，p110和p95均位于细胞核组分中。mAb 414免疫沉淀来自粗酵母细胞提取物的几种蛋白质，包括p110、p95和大约55-kD的蛋白质。亚细胞组分的免疫沉淀仅从纯化细胞核中产生p110和p95，而大约55-kD的蛋白质是从可溶性组分中免疫沉淀的。用脱氧核糖核酸酶消化纯化的细胞核以产生核膜，释放出部分p110，但大部分p110只有在用1 M NaCl处理核膜后才能溶解。酵母细胞和分离细胞核的免疫荧光定位显示细胞核呈点状和斑片状染色模式。共焦激光扫描免疫荧光显微镜较好地解决了点状和斑片状染色模式，并显示了核包膜的荧光区域。使用纯化细胞核和单克隆抗体414进行的后包埋免疫金电子显微镜显示酵母核膜上的胶体金修饰，但分解孔复合体的能力太差，无法实现进一步的超微结构定位。细胞核的免疫金标记和包埋表明孔复合体被修饰。因此，p110和/或p95定位于酵母的核膜，可能是核孔复合体的组成部分。