图5。

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CD2AP调节F-actin结构的形成。(A) 如材料和方法中所述,在1帧/10秒时记录表达DsRed-CD2AP和GFP-actin的HeLa细胞(参见视频8;网址:http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200609061/DC1). 方框中的区域表示在四个底部面板中放大的视频场,显示了荧光CD2AP(红色)标记的囊泡在四个不同时间的位移及其相关的荧光F-actin结构(绿色)。箭头指向CD2AP标记的囊泡。(B) 所用GFP融合蛋白的结构:全长CD2AP、包含CD2AP前两个SH3结构域的CD2AP N末端部分(1-175)、包含CD2AP第三个SH3域的CD2AP C末端部分、富含脯氨酸的区域和卷曲-卷曲结构域(194-639),以及交叉蛋白的五个串联SH3结构区(Inter-SH3)。表达不同结构(B)的(C–F)HeLa细胞在4°C下与VacA孵育1 h,并在37°C下清洗和孵育30 min。细胞被固定、渗透并处理以检测肌动蛋白(红色)和GFP融合结构(绿色)。通过共焦显微镜分析细胞。显示了与每个单独标签和合并图像相对应的一个共焦部分。方框中的区域指向具有不同GFP-CD2AP结构的转染细胞(显示在每个面板的左侧),这些结构被放大以显示是否存在与含有VacA的小泡相关的F-actin结构(用箭头表示)。插图中的箭头显示了F-actin结构的存在或不存在(1–175)(有关3D重建,请参阅视频9)。棒材,10μm;(A,插图),2μm。