图1。

TSC2对Rheb具有GAP活性。(A类)Rheb和TSC2是GTPase和GAP异常。催化活性位点精氨酸（粗体）在TSC2中不保守。Rheb含有精氨酸残基（粗体的残基）位于Ras密码子12对应的位置，其中含有甘氨酸。数字表示最后残留物的位置。(B)免疫沉淀TSC1/TSC2刺激Rheb的GTP水解。增加的免疫沉淀TSC1/TSC2的量（微升）与GST-Rheb在室温下放置20分钟。释放游离³²用放射性计数法测定对磷酸盐。背景减去对照免疫沉淀的活性。基础GTPaseRheb的活性被任意设定为1。(C类)与时间相关的GTPTSC1/TSC2刺激的Rheb水解。GTP水解在缺席(▪) 以及TSC1/TSC2的存在（°）。(D类)两者都不是TSC2的N端和C端区域对Rheb具有GAP活性。两个截断的TSC2结构（TSC2N，氨基酸1-1007；TSC2C，氨基酸1008-1765）与TSC1共表达，并进行免疫沉淀和分析GAP体外活性。本试验中使用的HA-TSC2的量相等至1μL英寸B。这些蛋白的表达水平为通过Western blot测定。(E类)TSC2（而非TSC1）具有GAP活性。转染HEK293细胞未经处理或用D-PBS、雷帕霉素（20nM）或LY294002（50μ。相对数量GAP分析中使用的TSC2通过Western blot测定，如下所示在下面每个酒吧。(F类)TSC1/TSC2降低Rheb-GTP水平体内试验。将Myc-Rheb转染HEK293细胞并用³²磷酸。Myc-Rheb免疫沉淀，结合核苷酸洗脱并在纤维素板上溶解。与联合转染显示TSC1和TSC2。包括Myc-RacL61作为对照。比率GTP/GDP的计算公式为GTP计数/3除以GDP计数/2，和上所示顶部每条车道的。