图3

活性氧的积累对自噬至关重要。(A类)上图：稳定转染GFP-GATE-16的CHO细胞在有或无10mM NAC或1000μ/ml过氧化氢酶的情况下预培养10分钟，然后在有或没有这些药物的情况下饥饿2小时，或在含有这些药物的对照培养基中生长2小时。然后固定细胞，渗透并用抗GFP单克隆抗体染色。显示了具有代表性的图像。下面板：HEK 293细胞转染GFP-GATE-16。在转染后24小时，用NAC或过氧化氢酶处理细胞并如上所述饥饿，在Ripa缓冲液中裂解，并在10%SDS-PAGE上分离100μg每种裂解产物，随后用抗GFP抗体进行分析，以检测转染的GATE-16和抗微管蛋白抗体作为对照。使用NIH图像程序对数据进行量化，并将其描述为总GATE-16中脂蛋白的百分比。(^*)表示非lipidated和(^**)表示固定的GFP-GATE-16。(B类)用NAC或过氧化氢酶处理的CHO细胞，并按照（A）中的详细说明饥饿，用DCFDA孵育，用共焦显微镜观察或用荧光仪分析，如图1. (C类)在α-MEM培养基或EBSS培养基中培养的CHO细胞中，或在用10 mM NAC预处理10分钟或用1000μ/ml过氧化氢酶过夜后，测量长寿命蛋白质的降解率。给出了一个具有代表性的实验。