Prox1通过整合素诱导淋巴内皮分化
9和其他信号级联
分子生物学。Cell Mishima等人18：1421补充材料
本文包含以下支持材料：
- 补充图3-VEGFR3对HUVEC形态和片状形成的影响。HUVEC感染了编码DNA-结合突变体（Mut）或野生型（WT）Prox1的腺病毒（Ad），以及编码VEGFR3野生型（WT）、显性阴性突变体形式（d.n.Mut）或者null的腺病毒。VEGFR3（D）显性阴性突变体的表达未观察到野生型Prox1（B）诱导的形态和片状形成变化的逆转，野生型VEGFR3E的表达也未模拟这种变化，这表明VEGFR4信号不参与调节Prox1的这些效应。棒材：200μm。
- 视频S1
- 视频S2
- 视频S3
- 视频4
- 视频S5
- 视频S6
- 视频S7
- 视频S8
- 补充图1-在未分化的Tc-Empty和Tc-Prox1 ESCs中，Tc调节Prox1的诱导表达。(A类)调节ES细胞中Prox1表达的策略。这个俄罗斯26启动子驱动四环素激活物（tTA）的cDNA。该tTA由一个Tc-反应元件和VP-16最小转录激活域组成。Prox1和内部核糖体进入位点（IRES）连接的Venus的表达由Tc调节启动子（hCMV*-1）驱动，该启动子被Tc（Tc-off-system）抑制。PA：聚腺苷酸信号。(B类)通过去除未分化ES细胞中的Tet诱导Prox1蛋白的表达。分别用抗FLAG和抗α-微管蛋白抗体对总裂解物进行免疫印迹，以检测Prox1（上面板）和α-微管蛋白（下面板）蛋白的水平。(C)小鼠胚胎源性淋巴管内皮细胞和ESC源性内皮细胞内源性和转基因Prox1表达水平的比较。使用定量RT-PCR检测Prox1在血管内皮细胞（BEC）、来源于E14小鼠胚胎的淋巴内皮细胞（LEC）（见材料和方法）和来源于ESC的内皮细胞中的表达。每个值代表三次测定的平均值；酒吧，SD。
- 补充图2-HUVEC中Ad-mediated Prox1表达。HUVEC被编码LacZ、DNA-结合突变体（Mut）或野生型（WT）Prox1的腺病毒以指示的感染多重性（m.o.i.）感染，并进行免疫印迹和免疫染色。(A类)分别用抗FLAG和抗α-微管蛋白抗体对总裂解物进行免疫印迹，以检测Prox1（上面板）和α-微管蛋白（下面板）的蛋白水平。(B类)用抗Prox1抗体检测HUVEC和HDLEC中Prox1（绿色）的表达，并用碘化丙啶（PI，红色）对细胞核进行反染。棒材：200μm。(C)验证抗人Prox1抗体（hProx1）用于检测在293T细胞中转染的FLAG标记的小鼠和人Prox1。请注意，所用抗体检测小鼠和人类Prox1蛋白的方式与检测抗FLAG抗体的方式相同。(D类)HDLECs和HUVECs内源性和转基因Prox1表达水平的比较。使用抗-hProx1抗体定量腺病毒（Ad）介导的小鼠Prox1（mProx1）在HUVEC中的表达水平，以及内源性人类Prox1在HDLEC中的水平。(E-J公司)腺病毒介导的Prox1表达对HUVEC中BEC和LEC标记表达的影响。HUVEC感染编码LacZ、DNA-结合突变体（Mut）或野生型（WT）Prox1的腺病毒，并采集总RNA和蛋白裂解物。通过实时定量PCR分析测定VE-cadherin（E）、VEGFR2（F）、足蛋白（G）和VEGFR3（H）转录物的表达。每个值代表三次测定的平均值；用特异性抗体对总裂解物进行免疫印迹，检测VEGFR3（I）和α-微管蛋白（J）蛋白的水平。
- 补充表1
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