图7

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AIP1增强TNF-α诱导的ASK1活性。(b条)AIP1增强TNF-α诱导的ASK1和JNK活化。BAEC通过载体控制(–)或AIP1构建物(AIP1-F、-N或-C)转染。细胞裂解物用于通过抗FLAG的Western blot测定蛋白质表达()ASK1和JNK活化通过体外激酶分析测定(b条). 每条车道下方显示了相对的ASK1和JNK活动(将TNF-α处理的病媒控制设置为1.0)。(c(c))AIP1增强ASK1诱导的EC凋亡。在没有或存在ASK1的情况下,用载体控制(–)或AIP1构建物(AIP1-F、AIP1-N和AIP1-C)转染BAEC。转染48小时后,用DAPI对细胞进行染色,并在荧光显微镜下计数细胞核断裂的凋亡细胞。显示凋亡率。所提供的数据是三个独立实验的平均值。不适用,AIP1-N+AIP1-C(d日)AIP1抑制TNF-α诱导的ERK激活。用AIP1构建物转染内皮细胞,然后进行TNF-α刺激(10 ng/ml,15分钟)。用磷酸化-ERK抗体进行Western blot检测ERK活化。用抗ERK蛋白免疫印迹法测定总ERK。另外两个独立实验也得到了类似的结果。(e(电子))AIP1增强的ASK1激活需要ASK1结合和AIP1的GAP活性。AIP1构建物在HA-tagged ASK1存在的情况下转染BAEC。蛋白表达通过Western blot和抗HA(针对ASK1)或抗FLAG(针对AIP1)测定。ASK1诱导的JNK活性测定如b条所显示的数据代表了三个类似的实验。