图2

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Akt是PC-1介导的细胞凋亡抵抗所必需的。(a) MDCK控制(F6)和MDCKPKD1Zeo公司(C8/68)通过模拟、WT(WT-Akt)或显性阴性(DN_Akt)Akt结构瞬时转染。用TNF-α诱导细胞凋亡(见材料和方法),用抗血凝素(HA)抗体(红色)对细胞进行染色以鉴定转染细胞,用转移酶介导的dUTP缺口标记(TUNEL)分析(绿色)显示凋亡细胞,并用Hoechst 33342(蓝核)进行复染可视化现场的所有细胞。模拟转染的C8/68细胞中几乎没有凋亡细胞,而在相同条件下处理的F6细胞中可以看到相当数量的凋亡细胞。在这两种细胞系中转染WT-Akt构建物时观察到类似的结果,而在这些细胞中转染DN-Akt后,在C8/68中可以看到较高的HA-阳性/TUNEL阳性细胞率。(b) 与a中的实验设计相同,但细胞裂解物是从瞬时转染的F6和C8/68细胞制备的,并使用抗HA和抗肌动蛋白抗体的混合物作为负荷对照进行Western blot分析。所有细胞系中的所有结构均达到了相同的表达水平。(c) a.在模拟转染细胞中,凋亡的百分比计算为TUNEL阳性细胞数与现场出现的总细胞数之比。在转染WT和DN-Akt的细胞中,凋亡百分比表示为TUNEL阳性细胞数与HA阳性细胞数之比。采用方差分析检验进行统计分析。每次两两比较的结果都达到了统计显著性(详见正文)。(d) 与在HepG2细胞中进行的a至c实验相同。细胞凋亡百分比和统计分析均按c。