图7。

PKCαC2结构域β链3和4中的赖氨酸残基是质膜靶向和Ca所必需的²⁺-依赖于PIP的绑定₂-含有磷脂小泡。共表达（A）YFP-PKCαC2/K209A/K211A和CFP-PKCαC2的细胞的CFP和YFP图像对，（B）YFP-PKCαC2/K209A/K211A和CFP-cPLA₂/PKC_CBLs或（C）YFP-PKCα和CFP-PKCα/K209A/K211A刺激细胞质Ca后55秒²⁺通过添加离子霉素发出信号。白色方框区域的插图、放大图和合并显示在每个面板的右侧。比例尺，10μm。结果代表了至少五个实验。（D）PKCαC2/K197A/K199A蛋白质和（E）PKCβC2/K209A/K211A蛋白质与磷脂囊泡结合的蛋白质-膜FRET分析，含（•）或不含（○）6%PIP₂（请参见图5图例了解详细信息）。使用希尔方程（实线）进行的最佳拟合分析得出[Ca²⁺]_1/2值为51±1.3 mM（+PIP₂)和94±4.1 mM（–PIP₂)对于PKCαC2/K197A/K199A和89±1.7 mM（+PIP₂)和122±3.2 mM（–PIP₂)用于PKCαC2/K209A/K211A。用于比较的虚线是野生型PKCαC2结合的希尔曲线图5A。