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图8。磷酸结合精氨酸在AGC激酶活化和磷酸化中的作用体内用表达HA或GST标记的野生型或突变型激酶的质粒转染COS7细胞。在48小时和最后4小时的血清饥饿期后,将细胞暴露于20 nM EGF中20分钟或1µM胰岛素中8分钟,如图所示,然后进行裂解。此后,用HA标签抗体或谷胱甘肽珠从细胞裂解液中沉淀激酶。(一个)测定激酶活性,并将其表示为野生型刺激值的百分比。数据是三个(RSK2、S6K1、MSK1和SGK1)或四个(PKBα)独立实验的平均值±SD,重复进行。(B类)对(A)沉淀的激酶进行SDS-PAGE分析。用指示的抗磷酸肽抗体对凝胶进行免疫印迹或蛋白质染色。