图6。磷酸化疏水基序对AGC激酶分子内激活的证据。(一个–E类)上面板：RSK2、S6K1、MSK1、PKBα和SGK1的野生型或点突变激酶结构域，均缺乏疏水基序（SGK1除外_61–431)，被PDK1预磷酸化或不被PDK1预磷酸化。此后，去除PDK1（RSK2分析中除外）。然后，在170µM（A、B和E）或360µM（C和D）的磷酸化（pHM）或非磷酸化（HM）疏水基序肽缺失或存在的情况下测定每个激酶的活性，并以最大活性的百分比表示。数据是（A）2–4个独立实验的4–10个观察值的平均值±SD，（B–D）三个独立实验或（E）重复样本的平均值，重复样本之间的差异小于5%，重复样本来自两次进行的具有类似结果的实验（A–D，下部面板）。为了控制等量的蛋白质和PDK1诱导的野生型和突变型激酶磷酸化，对反应的小份进行SDS-PAGE和蛋白质染色/抗-HA印迹或用PDK1位点的磷酸特异性抗体进行印迹。然而，在（A）中，HA-RSK2的磷酸化_1–373通过包括[γ-³²P] ATP与PDK1预孵育，然后与抗HA抗体沉淀，SDS-PAGE和放射自显影。