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2005年11月23日在线发布。 数字对象标识:10.1093/nar/gni175年

图1

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选择和筛选原则。()选择菌株的构建:菌株FYC2-6A用含有缺失基因的线性化质粒进行转化LYS2型、目标站点和标记KanR。在含有氨基糖苷G418的选择性培养基上进行选择后,将产生的菌株转化为含有缺失基因的线性化质粒ADE2型、目标位置和标记TRP1号机组因此,最终菌株表型为Trp+、KanR、Ade,赖氨酸. (b条)选择过程:用含有LEU2级标记并表达文库。在不含亮氨酸的选择性培养基(L板)上选择转化体后,重悬集落,并将固定量的细胞接种在选择完整选择标记物和表达载体存在的培养基(含有不含亮氨酸、腺嘌呤和赖氨酸的选择性培养基的LAK板)上。SSA,允许恢复选择标记的事件。(c(c))筛选过程中,将携带表达载体的菌株与携带基于lacZ基因断裂的报告者的菌株配对。诱导后,产生一个突变体,切割目标位点,并允许SSA恢复标记。在含有X-gal的平板上可以直接观察到LacZ基因的表达。灰色小球代表巨核酶(mega),白色小球代表β-半乳糖苷酶。

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