图4。PDK1结合和活化研究。野生型和突变型PDK1与源自S6K1疏水基序的磷酸肽的结合和激活。如材料和方法中所述，通过表面等离子共振分析野生型（wt）PDK1和所示突变体与包含S6K1疏水基序的磷酸肽的结合（S6K-pHM:SESANQVFLGFT*YVAPSV，其中T*表示磷酸三氢嘌呤）。(一个)传感器芯片SA用12RU的生物素化S6K-pHM肽包被，并在注射270nM野生型PDK1、PDK1[T148A]和PDK1[K76A]后分析结合。使用PDK1[R131A]或PDK1[Q150]未观察到与S6K-pHM的可检测结合（数据未显示）。(B类)如（A）所示，但对PDK1浓度范围（2–2150 nM）的结合进行了分析。绘制稳态结合时的响应水平与PDK1浓度的对数。估计K_d日通过使用Kaleidrograph软件将数据拟合到公式[m1×m0/（m0+m2）]获得。K_d日对于野生型PDK1等于642±131 nM，PDK1[T148A]K_d日=64±7 nM和PDK1[K76A]K_d日=1744±167毫微米。野生型PDK1或任何突变株均未检测到PDK1与非磷酸化S6K-HM肽（SESANQVFLGFTYVAPSV）的结合（数据未显示）。(C类)S6K-pHM和S6K-HM对指示形式的PDK1的激活。如材料和方法中所述，在存在指示浓度的S6K-pHM（闭合圆圈）和S6K-HM（开放圆圈）的情况下，使用肽底物（T308肽）测量PDK1活性。试验分为三次进行，两次单独的试验获得了类似的结果。结果为单个实验的平均±SD。