Lee的支持信息等。(2002)程序。国家。阿卡德。科学。美国 99(13), 8968–8973. (10.1073/pnas.132197599)

支持方法

行为评估。

行为监控。 使用开放式监测器(TruScan,Coulbourn Instruments,Allentown,PA)监测小鼠的总水平和垂直运动。在习惯化阶段之后,每周将小鼠暴露在监控器中一次,持续2小时。老鼠的动作是通过与两层光电池的相互作用来记录。测量的参数包括总移动次数、移动时间以及在水平面和垂直面上移动的距离(抬起)。水平运动测量小鼠的一般运动活动,从而测量运动回路的一般完整性,而饲养主要与多巴胺能神经系统的完整性有关。

加速旋转试验

Rotorod试验使用Rotamax 4(俄亥俄州哥伦布市哥伦布仪器公司)进行。训练小鼠在跌落时保持在旋转的滚筒上,使用轻微的电击。训练结束后,每周对小鼠进行两次测试,在7分钟内将转速从5 rpm提高到25 rpm。记录小鼠从杆上落下的时间。每天晚上至少在“夜间”前2小时重复三次,每半小时一次,每周一次。记录三次试验的平均潜伏期。最初,在三次试验中连续两天对老鼠进行“训练”。该测试研究小脑功能和下运动单位功能的完整性。

纹状体多巴胺和多巴胺代谢物的HPLC分析

使用高效液相色谱法分析大脑一半的纹状体中的单胺类神经递质和代谢物,并在+0.240 mV下进行电化学检测,基本上如所述(1)。多巴胺及其代谢产物3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、3-甲氧基吡喃胺(3-MT)、高香草酸(HVA)和5-羟色胺及其代谢物5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)在单一色谱中分离和检测。250个样品进行了超声波检测每升0.1 M HClO4重复等分试样(20l) 将所得的匀浆中的一份留作蛋白质分析,其余部分在7200℃离心´ (12000 rpm)持续10分钟50将1升上清液注入100×4.6 mm 3百万立方米18反相色谱柱,在含有0.1 M一氯乙酸、5-9%乙腈、0.4–0.5 g/升辛磺酸、0.3–0.4%三乙胺和100g/升EDTA。5-羟基-N个-以甲基色胺为内标。将样品峰的相对峰面积与外部标准进行定量比较。用Lowry法测定蛋白质等。(2).

1.Adrews,A.M.、Ladenheim,B.、Epstein,C.J.、Cadet,J.L.和Murphy,D.L.(1996)摩尔药理学。 50,1511–1519.

2.O.H.劳里、新泽西州罗斯堡、Farr、A.L.和Randall,R.J.(1951)生物学杂志。 化学。 193,265–275.