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BMC生物化学。2005; 6: 14.
2005年8月12日在线发布。 数字对象标识：10.1186/1471-2091-6-14
预防性维修识别码：项目经理1199579
PMID：16095542

低镁，反式-具有茎1不连续性的III型三级稳定锤头状核酶的切割活性

唐纳德·伯克通讯作者1,2和S Travis Greathouse酒店1
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

背景

细胞内环境中低浓度的游离镁可能会对锤头状核酶产生严重限制，尤其是对那些设计用于分子间的核酶(反式)宿主或病原体RNA的裂解。利用天然和人工核酶中具有“I型”拓扑结构的三级稳定基序（TSM）来稳定反式-裂开的锤头。具有“II型”或“III型”拓扑结构的核糖酶可能与转换为反式-解理设计，因为打开阀杆1或阀杆2末端的环以适应基底结合，预计会破坏TSM并消除三级稳定。

结果

阀杆1连同单股段封盖或位于该阀杆内部，包含基底结合和三级稳定功能。该茎在sTRSV锤头状核酶中被断开，从而将两种功能分离为离散的结构片段。由此产生的核酶，命名为“RzC”，在MgCl处裂解其13个核苷酸目标底物2浓度在25°C时低至0.2 mM，在37°C时为0.5 mM。在多次翻转条件下，在最高底物：RzC核酶比率下观察到近30次翻转。RzC的几个衍生物也观察到类似的稳定性。亚毫摩尔MgCl降低或消除了催化活性2三级相互作用减弱或缺失的核酶浓度。Eadie-Hofstee分析表明，稳定核酶和非稳定核酶以同等亲和力结合其底物，表明观察到的活性差异不是结合减弱的结果。一些稳定的和非稳定的核酶似乎折叠成异构异构体集合，其中只有一部分具有催化活性。

结论

具有“III型”拓扑结构的锤头状核酶可以转化为三级核酶，反式-解理设计。分离茎1的稳定和底物识别功能可以提高生理浓度的二价镁的裂解活性，同时保留对外源靶点的识别。变速箱-因此，利用所有天然锤头拓扑结构的三级稳定基序的切割核酶可以用于细胞内应用。

背景

自裂锤头状核酶包含三个由高度保守的核心连接的碱基对茎。茎1和2末端或茎内单链元素之间不同形态的第三稳定基序（TSM）增加了生理浓度的二价镁离子的裂解活性在体外和在单元格中[1-8]. 这一发现推动了人们对锤头状核酶与金属离子结合的兴趣死灰复燃[9,10]以及将细胞内表达的核酶用作基因敲除剂。细胞内环境中的低镁浓度可能是锤头状核酶的一个关键限制。虽然二价镁的细胞内总浓度约为3.5至8.5 mM31P化学位移表明游离镁2+范围为0.2至1.2 mM，通常为0.4至0.8 mM，具体取决于组织类型和生理状态[11-15]. 与此观点一致，发夹状核酶的细胞内动力学行为更接近于在体外在2.0 mM MgCl下进行的分析2比10 mM MgCl时2[16]. 因此，确定具有低镁活性的核酶拓扑结构和序列非常重要。

根据5'和3'端子是否分别位于阀杆1、2或3内，锤头分为I、II或III型（图​（图1A）。1安培). 不同的连接模式使得这三种类型在拓扑上不等价。三级稳定的I型锤头，如来自曼氏血吸虫，很容易适应反式-通过打开茎3末端的环来分裂。然而，在SMαl核酶中，来自底物和核酶链的核苷酸有助于建立稳定的三级相互作用，显著限制了在生理浓度的Mg下可以靶向切割的底物范围2+。我们最近描述了锤头状核酶RzB，该核酶来源于在体外从I型自裂锤头库中挑选。RzB携带一个人工TSM，该TSM几乎与要切割的RNA片段的序列无关，从而使实验设计摆脱了基于SMαl的核酶遇到的限制[4].

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一I、II和III型锤头状核酶。虚线所示的外围区域包含三级稳定基序，可以是任意大小的。指示阀杆1、2和3。B类来自sTRSV的III型锤头状核酶，显示了根据比较序列分析、突变数据和计算模型[2]预测的三级相互作用（根据参考文献[22]描述的成对相互作用）。

还没有报告将II型或III型拓扑用于低镁反式-解理。打开这些核酶茎1末端的环以适应底物结合，预计会破坏TSM并消除三级稳定。我们推断II型和III型锤头状核酶仍然可以用于反式-如果茎1的底物结合功能可以与环1中TSM的三级稳定功能分离，则在生理镁浓度下发生裂解。为此，我们构建了反式-从烟草环斑病毒卫星RNA（sTRSV）中分离出的III型自裂锤头核酶[17]. 通过将核酶的5'端和切割底物的3'端放在茎1内实现功能分离。具有不连续茎1的核糖酶在生理镁下表现出三级稳定性。我们进一步证明这种稳定性延伸到人类的卵裂ras（拉斯维加斯）癌基因mRNA片段。

结果与讨论

低镁放射性反式-用不连续茎1切割核酶

核酶“RzC”旨在保护sTRSV锤头状核酶的内源性三级相互作用。茎1的远端半部分和环1的全部（末端三碱基对和七核苷酸环）是连续的sTRSV序列。通过与茎1的近端半部分（三个碱基对）和所有茎3的碱基配对来识别基质。茎和环2是天然的sTRSV序列，也是为了保持三级相互作用（图​（图2）。2). 因此，核酶RzC将茎1的两个功能——底物识别和三级稳定——分离为离散的结构域。

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本研究中描述的核糖酶。显示了茎la、Ib、2和3。基板绞线被遮蔽。将参与确立RzC、RzCAΔ1和RzCΔ2中三级稳定作用的核苷酸装箱。

在10 mM MgCl中测量了RzC的催化活性2/pH值7.5/37°C反式-13聚体寡核苷酸的裂解表示为“底物C”。在最初的15秒内，超过40%的底物被裂解，产生至少3.2分钟的初始速率-1（图​（图3，三，钻石）。在5 mM和2 mM MgCl下观察到类似的快速解理2（未显示）。重要的是，RzC也在亚毫摩尔Mg下裂解底物C2+浓度，产生0.3 min的初始速率-1在0.5mM氯化镁中2（图​（图3，三，三角形）。当在25°C下测量活性时，核酶RzC在0.2 mM MgCl下继续快速裂解2（0.2分钟-1)（表​（表1）。1). MgCl浓度更高2需要观察缺乏TSM的最小核酶的可比比率，这表明来自sTRSV的TSM在不连续茎1的环境中起作用。

表1

sTRSV非连续核酶的动力学参数

[氯化镁2]，毫微米（f）∞（f）一k个一k个b条净初始速率，最小值-1
RzC【25】10.590.704.230.0401.75
0.50.540.582.030.0700.65
0.20.420.233.570.0910.37
0.10.110.620.920.0100.06
RzC【37】100.740.676.490.0133.2
50.630.772.310.0221.1
20.710.663.520.0231.7
0.50.730.380.980.0400.3
RzCΔl[37]100.680.783.920.122.09
50.760.715.220.0332.82
20.760.571.510.0620.67
0.50.580.0741.770.0280.09
RzCΔ2[37]100.510.557.10.0812
50.660.413.10.0250.85
20.580.2293.10.0360.43
0.5未注明日期。未注明日期。未注明日期。未注明日期。未注明日期。

方法中描述了不连续核酶的动力学参数。在25°C或37°C（核酶名称旁边的方括号）下进行单翻转反应，数据符合双指数曲线。未发现解理。在0.075和0.05mM MgCl下未观察到RzC的裂解2（未显示）。

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具有不同三级稳定性的不连续核酶对底物切割的镁依赖性。显示的痕迹是在37°C下10 mM（钻石）或0.5 mM（三角形）MgCl中的解理2使用表1中给出的最佳拟合参数，将数据拟合到方法中描述的双指数动力学模型。

构建了RzC的两个变体，以评估三级相互作用模块对观察到的镁依赖性的贡献。核糖酶RzCΔ1和RzC△2与茎1外的RzC相同。在核酶RzCΔ1中，7个核苷酸末端环序列5'UGUGCUUU3'被一个稳定的四环5'UUCG3'所取代，而在核酶R zC△2中，环和末端三个碱基对被完全移除。当在10 mM MgCl中监测反应时2，缺失对初始速率几乎没有影响，因为所有三种核酶都以2-3分钟的初始速率裂解底物C-1.降低MgCl2然而，浓度为2.0 mM时，初始卵裂率产生了明显的差异，RzC的卵裂率最大，而RzCΔ2的卵裂速率最慢。在0.5 mM MgCl中2RzC的初始速率是RzCΔ1的3倍（0.3 vs.0.09 min-1)RzCΔ2未检测到任何基底解理（图​（图3三和表​表1）。1). 有趣的是，RzCΔ1的速率比RzC△2的速率更接近RzC的速率。在低镁条件下，RzCΔ1的中间活性可能是由于使用回路2和回路1末端的稳定四回路之间的替代相互作用进行的弱三级稳定，尽管这种可能性尚未进一步探讨。

亚毫摩尔MgCl下RzC相对于RzCΔ1和RzC△2的活性增强2支持TSM稳定生产RNA折叠的基本假设。参与裂解反应快速阶段（f）的预退火核酶底物复合物的分数一)RzC在亚毫摩尔MgCl下仅略有降低2而RzCΔ1和RzC△2则急剧下降，表明RzC折叠成生产构象的核酶比例大于其他两种核酶。可以进入活性构象的核酶-底物复合物的分数由f给出∞（这一估计实际上是一个下限，因为它假定反反应可以忽略不计；这是一个合理的假设，因为三核苷酸3'裂解产物预计会迅速解离，从而最大限度地降低重新连接的可能性。）对于观察到裂解的反应，f的值∞不强烈依赖MgCl2尽管RzCΔ2的浓度略低于其他两种。总之，这些结果表明，来自sTRSV锤头的TSM序列元素在RzC中提供了类似的三级稳定。

底物亲和力不受TSM缺失的影响

为了排除RzC、RzCΔ1和RzC△2之间的速率差异可能是由于不同底物结合亲和力所致的可能性，使用1 nM核酶和过量底物（10至200 nM）测量了多重周转裂解动力学，作为底物浓度的函数。这些条件产生了4到28 nM的劈开产物，表明有4到28次移交。速率数据的Eadie-Hofstee图的斜率给出了核酶与底物相互作用的表观亲和力，即迈克尔利斯·曼顿常数Km。当在10 mM MgCl中监测多翻转反应动力学时2所有三种核酶的Km值都相当（RzCΔ1和RzC△2分别为~40 nM和~70 nM）。因此，底物亲和力主要由茎3内的碱基配对决定，并且不受三级对接相互作用或茎la和lb之间的堆积的实质性影响。因为单次翻转反应是使用底物（100 nM）上10倍多余的核酶（1000 nM）进行的如果底物的浓度高于估计的Km值（40–70 nM）一个数量级以上，则假定底物已与核酶完全结合。因此，RzC、RzCΔ1和RzC△2之间的镁敏感性差异不是由于酶的相对占有率，而是由于差异三级稳定引起的构象差异。在0.5 mM MgCl下无法比较三种核酶的亲和力2，因为只有RzC在这些条件下处于活动状态。其Eadie-Hofstee图中的轻微曲率可以解释为实验噪声，或者反映出低浓度底物比高浓度底物的亲和力更高。

亚毫摩尔氯化镁中序列上下文对裂解的影响2

生成了两种新的核酶，以确定不连续茎1锤头设计的一般性（图​（图2）。2). 首先，在构建体RzC4中，除了切割位点的GUC外，RzC中茎1和3的单个碱基对被反转为它们的Watson-Crick对立面。RzC4对镁的依赖性与RzC非常相似，与MgCl相比下降了4倍2从5 mM减少到0.5 mM（图​（图5，5，表​表2）。2). 第二，核酶RzC-ras（拉斯维加斯）被设计用来切割人类的15个核苷酸片段ras（拉斯维加斯）致癌基因。在已发表的细胞分析中，核酶介导的该位点的切割将ras-luciferase融合的表达降低了60%[18]. RzC的3'端-ras（拉斯维加斯）底物延伸到核酶之外，在茎1内形成分支连接。断裂ras（拉斯维加斯）核酶RzC底物-ras（拉斯维加斯）在2 mM和5 mM MgCl下都很稳定2，以0.48和0.83 min的初始速度进行-1分别达到约70%的计算平台。0.5 mM氯化镁2，初始解理率急剧下降（减少了40倍），尽管计算的平台仍约为70%，（图​（图55和表​表2）。2). 核酶RzC可能-ras（拉斯维加斯）在MgCl的最高浓度下进行分析时，最初折叠成活性构象2，但在最低浓度的MgCl下2它最初假定为非活性构象。在这些条件下，大多数物种的速率限制步骤是无活性到活性构象转换，这是由TSM的存在促进的。总之，在RzC中观察到的几个稳定特征也可以在其他序列环境中看到，包括底物包含与核酶不配对的侧翼核苷酸的序列环境。

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初始速率对镁的依赖性总结。在10（灰色条）、5（斜线阴影条）、2（白色条）和0.5（黑色条）mM MgCl中观察到的初始速率2归一化为5 mM MgCl中观察到的速率2。RzCΔ2的向下箭头表示在这些条件下未观察到解理。条形图上方的符号表示镁敏感性：“++”，中度镁依赖表示三级稳定；“+/-”中等镁依赖性，表明适度的三级稳定；“-”，强镁敏感性表明没有三级稳定。

表2

非连续锤头状核酶设计的推广

[氯化镁2]，毫微米F类∞F类一k个一k个b条初始速率，min-1
RzC4[37]50.320.240.077
20.270.130.036
0.50.350.0550.019
RzC公司-ras（拉斯维加斯）[37]50.691.210.83
20.690.451.440.0660.48
0.50.710.0170.012
RzD【37】50.520.1250.065
20.01350.01750.0024
0.50.8120.000320.00022

不连续锤头设计的一般化，遵循与表1相同的惯例。除2 mM MgCl下的RzC-ras外，大多数数据都很好地符合单指数速率方程2采用双指数速率方程。

阀杆1b稳定性的重要性

茎1和2的长度决定了相互作用的核苷酸在每个茎末端的位置。对于给定的稳定锤头状核酶，具有较短或较长茎1的变体预计不会保持三级稳定——它们的三级相互作用元件将更接近（或更远）核心，对于螺旋长度的每个碱基对变化，环1中的核苷酸将围绕螺旋轴旋转约30°。sTRSV和RzC锤头状核酶在茎1中有6个总碱基对（在茎la和1b中各有3个碱基对）。相比之下，桃潜伏花叶病毒（PLMVd）的锤头状核酶在其茎1中只有5个碱基对。在这种情况下，三核苷酸环1（UAA）与环2中的六环（UAGAGU）相互作用[2,4]. 核酶RzD被设计用于确定茎1中具有5个核苷酸的锤头状核酶是否可以从顺式-解理至反式-按照用于产生核酶RzC的设计策略进行切割。具体来说，茎1被分为三个碱基对茎la（促进分子间底物结合）和两个碱基对茎1b（保持最初的PLMVd三级相互作用）。与RzC相比，核酶RzD对二价镁的依赖性明显更强，初始切割率下降约为MgCl的300倍2从5 mM降至0.5 mM。因此，茎1b的2 bp似乎不足以支持不连续设计。

构象异质性和设计的通用性

锤头状核酶通常折叠成异质群体，其中一个子集迅速裂解，而剩余的RNA随着时间的推移转化为活性折叠，然后裂解。这种模式在双相动力学中很明显，这里描述了几个结构（图​（图3三和​和5；5; 桌子​表11和​和2）。2). 来自肠道吸虫寄生虫的三级稳定的1型锤头状核酶，曼氏血吸虫（SMα1），也表现出表明构象异质性的多相动力学[19]. 我们观察到来自多足目并发现通过改变茎1和3中的一些核苷酸，这种异质性基本上被消除了（M.Roychowdhury和D.Burke，正在准备中）。虽然构象异质性影响初始速率和催化机制的化学解释，但只要靶RNA能够被足够快地切割以发挥所需的生物效应，它与细胞内表达的核酶对基因表达的调节的相关性就很小。核酶RzC中使用的不连续设计在生理浓度的二价镁下产生快速、多次翻转的裂解，从而证明其在细胞内使用的潜在用途。

当这份手稿还在准备中时，温伯格和罗西描述了一种略为不同的带有不连续茎1的锤头的设计，在这种结构中，通过在不连续处引入一个新茎，核酶和底物之间可以形成额外的碱基对[20]. 尽管这些作者仅评估了在高二价镁（10 mM）条件下的单翻转解理，但此处描述的结果表明，Weinberg和Rossi设计也可能允许在镁的亚毫摩尔浓度下解理。

结论

这里描述的“不连续阀杆1”设计利用了自然稳定三级相互作用在近似本地结构环境中的优势反式-生理浓度MgCl下模型底物的裂解2该设计对来源于sTRSV锤头状核酶的核酶特别有效，而对来源于PLMVd的核酶则明显无效。锤头状核酶RzC在MgCl有效地切割其13核苷酸靶底物2浓度在25°C时低至0.2 mM，在37°C时为0.5 mM。在亚毫摩尔MgCl下，催化活性降低或消除2三级相互作用减弱或消除的核酶浓度（RzCΔ1）。另外两种核酶改变了内部引导序列，其中一种是针对人类的ras（拉斯维加斯）致癌基因在低浓度氯化镁中是活跃的2，证明该设计可用于对抗其他目标。我们设想反式-利用sTRSV或其他II型或III型锤头病毒的三级稳定基序的裂解核酶可用于基因治疗或其他细胞内应用。

方法

核糖酶、RNA底物和寡核苷酸

RNA底物由Dharmacon（Lafayette，CO）合成，DNA寡核苷酸由Integrated DNA Technologies（Coralville，IA）合成。核糖酶是通过转录合成的在体外合成DNA模板，然后按照说明进行放射性标记和纯化[21].

单次周转动力学参数和初始速率的确定

基本上按照所述进行动力学分析[4]. 简单地说，对于单循环反应，将10 pmol的末端标记底物RNA与100 pmol的核酶混合在Tris-HCl中，pH值为7.5（反应中的最后50 mM），加热至90°C 1分钟，然后缓慢冷却至反应温度。在25°C或37°C下平衡5分钟后，将十分之一的样品作为零时间点去除，并在等体积的缓冲液（95%甲酰胺、20 mM EDTA、0.5%溴酚蓝、0.5%二甲苯氰醇）中淬火。通过添加MgCl启动剩余样品的裂解反应2达到所需浓度。在不同时间取出等分试样，并在停止缓冲液中淬火。通过变性（7 M尿素）12%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离分离分离出分离的和未分离的底物。使用分子动力学的ImageQuant软件对凝胶中的条带进行量化。数据首先由一个单指数方程建模保存图片、插图等的外部文件。对象名为1471-2091-6-14-i1.gif，其中ft吨=给定时间裂解的分数（裂解/（裂解+未裂解）），f0=零点校正（本质上为零），f∞=无限时间的估计平台值，以及k光突发事件=观察到的一阶速率常数。那些不能被充分建模为单指数过程的数据集，使用方程拟合为双指数过程保存图片、插图等的外部文件。对象名为1471-2091-6-14-i2.gif，其中k一和kb条是k吗光突发事件两个指数衰减过程的值，以及“一“是活性核酶分成两个过程中较快的部分。初始切割率是通过对上述单指数或双指数方程进行一阶导数并求解t=0来计算的。例如，忽略f0项，双指数过程的初始速率由速率=f给出∞•a•k一+（f）∞•（1-a）•kb条使用1 nM核酶和过量底物（10至200 nM）以类似的方式进行多重周转反应。

缩写

TSM，第三稳定基序；烟草环斑病毒的卫星RNA sTRSV；PLMVd，桃潜伏花叶病毒。

作者的贡献

STG进行了酶动力学分析。DHB构思了这项研究，参与了其设计并起草了手稿。两位作者阅读并批准了最终手稿。

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用于确定底物结合亲和力的Eadie-Hofstee图。反应速度（vo个)以微米为单位•最小-1归一化为总核酶浓度（1 nM）。每个图上显示的是核酶种类、氯化镁浓度2单位为毫摩尔（括号内）和计算的Km值（斜率的负值）。0.5 mM MgCl下RzC的灰色趋势线2将数据集细分为陡坡和浅坡区域，Km值分别为90 nM和12 nM。

致谢

作者感谢Peter Unrau（西蒙·弗雷泽大学）、Manami Roychowdhury-Saha和Vanvimon Saksmerprome对手稿的评论，以及Sugata Roychowodhury在项目早期进行的深入讨论。这项工作得到了Earl G.Sturdevant、Harry G.Day、Indiana University Honors College和HHMI奖学金基金向S.T.G.提供的本科生研究资助，以及NIH授予的AI45344和David and Lucille Packard跨学科科学项目向D.H.B.提供的资助。

工具书类

  • Blount K，Uhlenbeck O。锤头状核酶的结构-功能困境。生物物理生物分子结构年鉴。2005;34:415–440. doi:10.1146/annurev.biophys.34.122004.184428。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Khvorova A，Lescoute A，Westhof E，Jayasena SD。锤头状核酶催化核心外的序列元素可激活细胞内活性。自然结构生物学。2003;10:708–712. doi:10.1038/nsb959。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • De la Peña M，Gago S，Flores R.天然锤头状核酶的外围区域大大增加了其自我分裂活性。EMBO J。2003;22:5561–5570. doi:10.1093/emboj/cdg530。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Saksmerpome V、Roychowdhury-Saha M、Khvorova A、Jayasena S、Burke DH。体外的选择反式-在亚毫摩尔镁中活性的锤头状核酶。RNA。2004;10:1916–1924. doi:10.1261/rna.7159504。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Penedo J、Wilson T、Jayasena S、Khvorova A、Lilley D。辅助元素的相互作用增强了天然锤头状核酶的折叠。RNA。2004;10:880–888. doi:10.1261/rna.5268404。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Canny M，Jucker F，Kellogg E，Khvorova A，Jayasena S，Pardi A.天然锤头状核酶的快速裂解动力学。美国化学学会杂志。2004;126:10848–10849. doi:10.1021/ja046848v。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Uhlenbeck O.少并不总是多。RNA。2003;9:1415–1417. doi:10.1261/rna.5155903。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Hammann C，Lilley D.锤头状核酶的折叠和活性。化学生物化学。2002;三:690–700. doi:10.1002/1439-7633（20020802）3:8<690:：AID-CBIC690>3.0.CO；2-摄氏度。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Kisseleva N，Khvorova A，Westhof E，Schiemann O。电子顺磁共振波谱研究锰（II）与三级稳定锤头核酶的结合。RNA。2005;11：1-6.数字对象标识代码：10.1261/rna.7127105。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Suzumura K，Takagi Y，Orita M，Taira K。基于NMR对锤头状核酶中A9/G10.1位点前Rp氧金属离子配位的重新评估。美国化学学会杂志。2004;126:15504–15511.[公共医学][谷歌学者]
  • Willcocks J，Mulquiney P，Ellory J，Veech R，Radda G，Clarke K。低游离M的同时测定g2型+人类镰状细胞的pH值31P核磁共振波谱。生物化学杂志。2002;277:49911–49920. doi:10.1074/jbc。M207551200。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Uetani T、Matsubara T、Nomura H、Murohara T、Nakayama S.Ca2+-细胞内镁的依赖性调节2+阿米洛利和KB-R7943在猪颈动脉中的浓度。生物化学杂志。2003;278:47491–47497. doi:10.1074/jbc。M307898200。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • 科恩·S、伯特·C。31完整肌肉中磷酸肌酸的P核磁松弛研究：细胞内游离镁的测定。美国国家科学院院刊。1977;74:4271–4275. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Millart H，Durlach V，Durlach J.红细胞镁浓度：分析问题和意义。马格纳斯研究。1995;8:65–76.[公共医学][谷歌学者]
  • Mildvan A.镁和其他二价阳离子在ATP利用酶中的作用。镁。1987;6:28–33.[公共医学][谷歌学者]
  • Yadava R，Mahen E，Fedor M.酵母中核酶底物复合物形成的动力学分析。RNA。2004;10:863–879. doi:10.1261/rna.5234204。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Prody G，Bakos J，Buzayan J，Schneider I，Bruening G.二聚体植物病毒卫星RNA的自溶处理。科学。1986;231:1577–1580.[公共医学][谷歌学者]
  • Scherr M，Grez M，Ganser A，Engels J.特异性锤头状核酶介导的突变N-ras mRNA的切割在体外和体外寡核苷酸作为治疗剂。生物化学杂志。1997;272:14304–14313. doi:10.1074/jbc.272.22.14304。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Osborne E，Schaak J，DeRose V.血吸虫源天然锤头状核酶的特性。RNA。2005;11:187–196. doi:10.1261/rna.7950605。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Weinberg M，Rossi J.具有天然衍生非服务序列基序的转叶锤头状核酶的比较单转换动力学分析。FEBS信函。2005;579:1619–1624. doi:10.1016/j.febslet.2005.02.016。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Burke DH、Ozerova NDS、Nilsen-Hamilton M.变构锤头TRAP核酶。生物化学。2002;41:6588–6594. doi:10.1021/bi0201522。[公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
  • Leontis NB，Westhof E.RNA碱基对的几何命名和分类。RNA。2001;7:499–512. doi:10.1017/S135583821002515。 [PMC免费文章][公共医学] [交叉参考][谷歌学者]
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