图4。

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Ubp10p活性的丧失导致组蛋白H3 Lys4和Lys79甲基化增加,端粒Sir3p结合减少。使用菌株UCC4825(野生型)、UCC4857进行体内交联分析(ubp10Δ),UCC4870(ubp10C371S型),UCC4836(ubp10Δ94-250)和UCC4836(sir4Δ). 使用H3 Lys4三甲基化、H3 Lys 79二甲基化或Sir3p特异性抗体进行H3 Lys1和Lys79甲基化和Sir3p结合的ChIP分析。进行多重PCR扩增以评估端粒VIR和HMR公司,活动SAN1公司基因和被抑制的加仑1基因。作为对照,扩增总裂解物的DNA。(A) Vistra Green染色PCR扩增的典型示例。(B到D)面板A中数据的定量分析。H3 Lys4和Lys79甲基化的值表示查询基因的免疫沉淀与总裂解物的比率,与SAN1公司Sir3p结合的值表示端粒VIR的免疫沉淀与总裂解物的比率标准化为HMR公司。所有值均为至少两个独立实验的平均值。误差条表示标准偏差。(B) 端粒VIR处H3 Lys4三甲基化的相对折叠变化加仑1(C)端粒VIR处H3 Lys79甲基化相对增加加仑1(D)端粒病毒Sir3p结合的相对降低。