概述
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产品名称 人TRAF6敲除HeLa细胞系 -
亲代细胞系 赫拉 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,纯合子:外显子2插入1 bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻培养基DMSO无血清培养基,在补充有甲基纤维素的MEM中含有8.7%DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的融合时,应使其传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11,12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 E3泛素连接酶与UBE2N和UBE2V1一起,调节与蛋白质偶联的“Lys-63”连接的聚泛素链的合成,如IKBKG、AKT1和AKT2。 还介导导致MAP3K7活化的自由/非锚定多泛素链的泛素化。 导致NF-kappa-B和JUN的激活。可能对功能性破骨细胞的形成至关重要。 似乎也在树突状细胞(DC)成熟和/或活化中发挥作用。 抑制B淋巴细胞中c-Myb介导的反式激活。 适配器蛋白似乎在通过TNF受体、IL-1受体和IL-17受体启动的信号转导中发挥作用。 -
组织特异性 表达于心脏、大脑、胎盘、肺、肝脏、骨骼肌、肾脏和胰腺。 -
通路 蛋白质修饰; 蛋白质泛素化。 -
序列相似性 属于TNF受体相关因子家族。 亚科。 包含1个MATH域。 包含1个环形锌指。 包含2个TRAF型锌指。 -
域 螺旋结构域介导同源和异源齐聚。 MATH/TRAF结构域与受体细胞质结构域结合。 -
翻译后 修改 SUMO1对Lys-124、Lys-142和Lys-453进行Sumoylated。 Lys-124上的多泛素化; 用IL-1-β或TGF-β刺激细胞后。 这种配体诱导的细胞刺激导致TRAF6分子的二聚/齐聚,然后是涉及UBE2N和UBE2V1的自泛素化,并导致TRAF5活化。 这种“Lys-63”位点特异性聚泛素化似乎与信号分子的激活有关。 内源性自身泛素化只发生在细胞质形式。 -
手机定位 细胞质。 细胞质>细胞皮层。 核心。 发现于一些侵袭性B细胞淋巴瘤细胞系的细胞核以及静止和活化的T淋巴细胞和B淋巴细胞的细胞核中。 发现于点状核体蛋白复合物中。 泛素化可能发生在细胞质中,也可能发生在细胞核中。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗TRAF6抗体[EP592Y]( 约40675 )稀释1/500 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: TRAF6敲除HeLa细胞裂解物 车道3: HAP1细胞裂解物 车道4: Daudi细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 60千Da 观察到的频带大小: 65千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约40675 在65 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约40675 western blot显示与野生型HeLa细胞中的TRAF6反应。 敲除细胞系ab266009(敲除细胞裂解物 ab257760型 )已使用。 对野生型HeLa和TRAF6敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约40675 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1/500和1/20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗TRAF6抗体[EP591Y]( ab33915型 )稀释1/2000 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: TRAF6敲除HeLa细胞裂解物 车道3: HAP1细胞裂解物 车道4: Daudi细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 60千Da 观察到的频带大小: 65千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab33915型 在65 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab33915型 western blot显示与野生型HeLa细胞中的TRAF6反应。 敲除细胞系ab266009(敲除细胞裂解物 ab257760型 )已使用。 对野生型HeLa和TRAF6敲除HeLa细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 第33915页 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,稀释率分别为1:2000和1:20000。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子2插入1 bp。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载