概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9、外显子12中13 bp缺失和外显子12中插入选择盒实现敲除 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( ab255593号 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化准则: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/暂停 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:11、12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:15、20 TH01:7、9.3 TPOX:11、12 CSF1PO:12个 -
无支原体 是的 -
存储说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 与许多转录因子结合的转录辅抑制因子。 抑制NF-kappa-B调节的基因表达。 抑制由FOXA2、CTNNB1和TCF家族成员在Wnt信号中介导的转录激活。 全长TLE家族成员的效应可能通过与显性负AES的关联而受到调节。 作为ESRRG共激活剂的异常功能。 -
组织特异性 在所有被检查的组织中,主要是大脑、肝脏和肌肉。 -
序列相似性 属于WD repeat Groucho/TLE系列。 包含6个WD重复。 -
域 WD重复序列Groucho/TLE家族成员由5个区域组成,一个富含谷氨酰胺的Q结构域、一个富含甘氨酸/脯氨酸的GP结构域、包含核定位信号的中央CcN结构域和一个富含丝氨酸/脯氨酸的SP结构域。 最保守的是N端Q结构域和C端WD-重复结构域。 -
翻译后 修改 磷酸化,可能由CDK1引起。 磷酸化程度在整个细胞周期中变化,在G2/M转变时最高。 随着细胞分化和与HES1或RUNX1的相互作用而发生过度磷酸化。 XIAP/BIRC4实现了泛素化。 -
细胞定位 核心。 核和染色质相关,取决于亚型和磷酸化状态。 过磷酸化降低了核成分的亲和力。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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石蜡包埋固定(A)亲本HEK293(人胚胎肾上皮细胞)细胞颗粒(B)TLE1敲除HEK292(ab265059)细胞颗粒的免疫组织化学分析 约183742 室温下,1/250稀释30分钟。 LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)用作二级抗体。 使用苏木精进行反染色。 野生型HEK293T细胞颗粒呈阳性染色,TLE1基因敲除的HEK293细胞颗粒无染色。 免疫染色在徕卡生物系统BOND®RX仪器上进行。 用柠檬酸缓冲液(pH 6.0,表位检索溶液1)进行热介导抗原检索20分钟。 -
4%对甲醛固定、0.1%TritonX-100透性野生型HEK293T细胞和TLE1敲除的HEK293 T细胞(ab265059)的免疫荧光分析 约183742 (绿色)1/50稀释。 Alexa Fluor®488山羊抗狂犬病IgG H&L( 约150081 )用作二级抗体,以1/1000稀释度预先吸收。 Alexa Fluor®594抗alpha Tubulin小鼠单克隆抗体( 约195889年 )用作微管标记物复染(红色)。 细胞核用DAPI(蓝色)复染。 共焦图像显示野生型HEK293T细胞中有核染色,TLE1敲除的HEK293细胞中没有染色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗TLE 1抗体[EPR9386(2)]( 约183742 )稀释1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: TLE1敲除HEK293T细胞裂解物 车道3: HepG2细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 83千帕 观察到的频带大小: 83千帕 1-3车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab183742年 在83 kDa时观察到。 红色负载控制, 约8245 在37 kDa时观察到。 ab183742年 抗TLE 1抗体[EPR9386(2)]被证明与野生型HEK293T细胞中的TLE 1特异性反应。 当敲除细胞系ab265059(敲除细胞裂解物 ab257240磅 )被使用。 对野生型和TLE 1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约183742 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )在成像前在室温下以万分之一稀释1小时的二次抗体。 -
等位基因1:第12外显子13 bp缺失。 -
等位基因2:选择盒插入第12外显子。 -
TLE1敲除HEK293T细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HEK293 T细胞的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的粘附、上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载