概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:在外显子4中插入1 bp。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 .
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1毫升 -
粘附/暂停 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8、9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 结合泛素并可能通过TNF-α、神经生长因子(NGF)和白细胞介素-1调节NFKB1活化的适配器蛋白。 可能在肌肉细胞的TIN/TTN下游信号传导中发挥作用。 可能通过泛素化调节信号级联。 调节TRAF6和CYLD之间相互作用的适配器(通过相似性)。 可能参与细胞分化、凋亡、免疫反应和K(+)通道的调节。 -
组织特异性 普遍表达。 -
参与疾病 SQSTM1的缺陷是骨Paget病(PDB)的原因[MIM:602080]。 PDB是一种影响轴向骨骼的代谢性骨病,其特征是由于破骨细胞激活而导致局部骨转换增加和紊乱。 该病的表现包括骨痛、畸形、病理性骨折、耳聋、神经并发症和骨肉瘤风险增加。 PDB是一种慢性病,影响2-3%的40岁以上人口。 -
序列相似性 包含1个OPR域。 包含1个UBA域。 包含1个ZZ型锌指。 -
域 UBA结构域特异性结合多泛素化底物的“Lys-63”连接的多泛素链。 调节与TRIM55的交互。 OPR结构域介导同齐聚反应以及与PRKCZ、PRKCI、MAP2K5和NBR1的相互作用。 ZZ型锌指介导与RIPK1的相互作用。 -
翻译后 修改 磷酸化。 可能被PRKCZ磷酸化(通过相似性)。 通过TTN体外磷酸化。 -
手机定位 细胞质。 晚期内体。 核心。 沙科姆(根据相似性)。 在心肌中,位于肌节带(根据相似性)。 定位于晚期内体。 也可能局限于细胞核。 分别在阿尔茨海默病和帕金森病患者的神经纤维缠结和神经元路易体中积聚。 富含毛细胞星形细胞瘤的罗森塔尔纤维。 在肝细胞中,积聚在与酒精性肝炎、威尔逊病、印度儿童肝硬化相关的马洛里体和与肝细胞癌相关的透明体中。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗SQSTM1/p62抗体[2C11]-BSA和无叠氮化合物( 约56416 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: SQSTM1敲除HEK293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的频带大小: 62千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约56416 在62kDa处观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负载控制( 约181602 )在37 kDa时观察到。 约56416 western blot显示与野生型HEK293T细胞中的SQSTM1反应。 当敲除细胞系ab255343(敲除细胞裂解物 约263770 )已使用。 野生型HEK293T和SQSTM1敲除型HEK2903T细胞裂解物接受SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约56416 和抗-GAPDH抗体[EPR16891]-负荷控制( 约181602 )在4°C下过夜,稀释率分别为1:1000和1:20000。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( 约216772 )和山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗-SQSTM1/p62抗体[EPR4844]-自噬体标记( 约109012 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: SQSTM1敲除HEK293T细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 47千Da 观察到的频带大小: 64千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约109012 在64 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 约109012 western blot显示与野生型HEK293T细胞中的SQSTM1反应。 当敲除细胞系ab255343(敲除细胞裂解物 约263770 )已使用。 野生型HEK293T和SQSTM1敲除型HEK2903T细胞裂解物接受SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 约109012 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在4°C下过夜,分别以1比10000和1比20000稀释。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
测序色谱图显示外显子4的序列编辑 -
纯合子:第4外显子插入1 bp
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载