概述
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产品名称 -
亲代细胞系 HEK293吨 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子2的14bp缺失和外显子2中的2bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HEK293T细胞系( 约255449 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致丧失生存能力。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
该产品受布罗德研究所和ERS基因组学有限公司的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肾 -
单元格类型 上皮的 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:8,9 D13S317:12、14 D7S820:11 D16S539:9、13 vWA:16、19 TH01:7、9.3 TPOX:11个 CSF1PO:11、12 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 颗粒蛋白可能具有细胞因子样活性。 它们可能在炎症、伤口修复和组织重塑中发挥作用。 颗粒素-4促进培养的上皮细胞系A431的增殖,而颗粒素-3作为颗粒素-4的拮抗剂,抑制生长。 -
组织特异性 在原核细胞系、早幼粒细胞系和原红细胞系的髓性白血病细胞系、成纤维细胞中,以及在上皮细胞系中非常强。 存在于炎症细胞和骨髓中。 肾脏中含量最高。 -
参与疾病 GRN缺陷是泛素阳性额颞叶痴呆(UP-FTD)的原因[MIM:607485]; 也称为与17号染色体相关的tau-negated额颞叶痴呆。 额颞叶痴呆(FTD)是65岁以下人群中第二常见的痴呆原因。 这是一种常染色体显性神经退行性疾病。 -
序列相似性 属于颗粒蛋白家族。 -
翻译后 修改 颗粒是二硫键桥联的。 -
手机定位 保密。 -
UniProt提供的信息
关联产品
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KO细胞裂解物 -
相关产品
应用
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图像
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所有车道: 抗粒蛋白抗体[EPR15864]( 约208777 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T裂解物 车道2: 人GRN(颗粒蛋白)敲除HEK-293T细胞株(ab266738) 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 预测的带宽大小: 64千帕 观察到的频带大小: 64千帕 约208777 Western blot显示与野生型HEK293T细胞中的GRN反应,在GRN敲除细胞系ab266738中观察到信号丢失。 对野生型HEK293T和GRN敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 将膜在TBST中的5%牛奶中封闭1小时,然后与 约208777 以1/1000的稀释度在4°C下过夜。 在成像之前,用0.2µg/mL的二级抗体培养斑点。 该数据由YCharOS Inc.提供,这是一家开放科学公司,其使命是表征所有人类蛋白质的市售抗体试剂。 Abcam和YCharOS正在合作,通过使生命科学界能够更好地评估商用抗体,帮助解决再现性危机。 -
所有车道: 抗粒蛋白抗体[EPR15864]( 约208777 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型HEK293T细胞裂解物 车道2: GRN敲除HEK293T细胞裂解物 3号车道: HepG2细胞裂解物 车道4: HAP1细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释度为1/10000 预测的带宽大小: 64千帕 观察到的频带大小: 74千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab208777型 在74 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 在36 kDa时观察到。 约208777 抗粒蛋白抗体[EPR15864]显示与野生型HEK293T细胞中的粒蛋白特异性反应。 敲除细胞系ab266738(敲除细胞裂解物 ab257235型 )被使用。 对野生型和颗粒蛋白敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约208777 和抗GAPDH抗体[6C5]-负载对照( 约8245 )分别在1000倍和20000倍稀释液中培养2.5小时。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:外显子2中14 bp缺失 -
等位基因2:外显子2缺失2 bp。 -
GRN敲除HEK293T细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HEK293 T细胞的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的黏附上皮样形态。 使用EVOS M5000显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载