概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9实现敲除,在外显子4中插入1bp,在外显子4中缺失2bp,在外显子4中缺失7bp -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 1 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约255450 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
该产品受布罗德研究所、ERS基因组学有限公司和Sigma Aldrich有限责任公司的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1毫升 -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
STR分析 Amelogenin X、Y D5S818:11 D13S317:11号文件 D7S820:8、11 D16S539:11、12 vWA:14 TH01:8、9.3 TPOX:8、11 CSF1PO:10、12 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 以IL2依赖性和PDCD1非依赖性的方式参与共刺激信号,对T细胞增殖和IL10和IFNG的产生至关重要。 与PDCD1的相互作用抑制T细胞增殖和细胞因子的产生。 -
组织特异性 在心脏、骨骼肌、胎盘和肺中高度表达。 在胸腺、脾脏、肾脏和肝脏中弱表达。 在活化的T细胞和B细胞、树突状细胞、角质形成细胞和单核细胞上表达。 -
序列相似性 属于免疫球蛋白超家族。 BTN/MOG系列。 包含1个Ig样C2型(免疫球蛋白样)结构域。 包含1个Ig样V型(免疫球蛋白样)结构域。 -
手机定位 细胞膜和内膜系统。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
重组蛋白 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗PD-L1抗体[CAL10]-小鼠IgG2a(嵌合)( 约279293 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549处理的IFN-γ(100 ng/mL,48 h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549车辆控制IFN-gamma(0 ng/mL,48 h)细胞裂解物 车道3: CD274敲除A549处理的IFN-γ(100 ng/mL,48 h)细胞裂解物 车道4: CD274敲除A549车辆控制IFN-gamma(0 ng/mL,48 h)细胞裂解物 车道5: 人胎盘细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 33千帕 观察到的频带大小: 45-65千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗PD-L1抗体[CAL10]-小鼠IgG2a染色,稀释度为1/1000,以绿色显示; 兔抗GAPDH抗体[EPR16891]( 约181602 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab279293磅 显示与PD-L1特异结合。 在处理过的野生型A549细胞裂解液中,在45-65 kDa处观察到一条带,在Cd274敲除细胞系ab267054(敲除细胞裂解液 约256831 ). 为了生成此图像,分析了野生型和Cd274敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 二级抗体为羊抗鼠IgG H&L 800CW和羊抗兔IgG H&L 680RD,稀释度为1/20000。 -
测序色谱图显示外显子4的序列编辑 -
所有车道: 抗PD-L1抗体[CAL10]-大鼠IgG2a(嵌合)( 约279294 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549处理IFN-γ(100 ng/ml)48小时细胞裂解液 车道2: CD274敲除A549处理48小时细胞裂解物的IFN-γ(100 ng/ml) 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 33千帕 观察到的频带大小: 48千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗PD-L1抗体[CAL10]-大鼠IgG2a染色,稀释1/1000,以绿色显示; 兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y]( 约52866 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约279294 显示与PD-L1特异结合。 在处理过的野生型A549细胞裂解液中在48 kDa处观察到一条带,在Cd274敲除细胞系ab267054(敲除细胞裂解液 约256831 ). 为了生成此图像,分析了野生型和Cd274敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab253031号 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )以1/2000稀释。 -
所有车道: 抗PD-L1抗体[CAL10]-小鼠IgG1(嵌合)( ab279292磅 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549处理IFN-γ(100 ng/ml)48小时细胞裂解液 车道2: CD274敲除A549处理48小时细胞裂解物的IFN-γ(100 ng/ml) 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 33千帕 观察到的频带大小: 48千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗PD-L1抗体[CAL10]-小鼠IgG1染色,稀释度为1/1000,以绿色显示; 兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y]( 约52866 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约279292 显示与PD-L1特异性结合。 在处理过的野生型A549细胞裂解液中在48 kDa处观察到一条带,在Cd274敲除细胞系ab267054(敲除细胞裂解液 约256831 ). 为了生成该图像,分析野生型和Cd274敲除的A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中3%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗小鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )以1/2000稀释。 -
所有车道: 抗PD-L1抗体[EPR19759]( 第213524页 )稀释度为1/1000 车道1: 用100 ng/ml干扰素γ处理野生型A549( ab259377号 )48小时细胞裂解物 车道2: 用100 ng/ml IFN-γ处理的CD274敲除A549( ab259377号 )48小时细胞裂解物 车道3: U-87 MG细胞裂解物 车道4: MCF7细胞裂解物 车道5: 野生型A549未经处理的细胞裂解物 车道6: CD274敲除A549未经处理的细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 33千帕 观察到的频带大小: 50千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-6车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab213524号 在50 kDa时观察到。 红色-抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 ab213524号 western blot显示,在100 ng/ml IFNγ处理48 h细胞的野生型A549中与PD-L1反应。 当经处理和未经处理的敲除细胞系ab267054(经处理和不经处理的敲出细胞裂解物 约256831 )使用了。 野生型A549用100 ng/ml IFNγ处理48 h,CD274敲除型A549使用100 ng/ml IFNγ治疗48 h细胞裂解物进行SDS-PAGE。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 第213524页 和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000和1/20000的稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第4外显子7 bp缺失 -
等位基因2:第4外显子2 bp缺失。 -
等位基因3:在外显子4中插入1 bp。 -
CD274敲除A549细胞的代表性图像,低汇合和高汇合示例(左上和右上)和野生型A549细胞,低汇流和高汇流示例(左下和右下)显示典型的黏附上皮样形态。 使用EVOS M5000显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
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